[發明專利]血清外泌體微小RNAs的應用和肝癌檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202010631351.8
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN111826443B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 蔣宇揚;陳妍;樊婷婷;孫欽升;李露露;張存龍;吳偉彬
• 申請（專利權）人: 清華大學深圳國際研究生院;深圳市坤健創新藥物研究院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 北京思創大成知識產權代理有限公司 11614
• 代理人: 高爽

本發明屬于生物醫藥領域，涉及血清外泌體微小RNAs的應用和肝癌檢測試劑盒。所述試劑盒包括檢測物，所述檢測物包括：與血清外泌體微小RNA hsa?miR?203b?5p特異性結合的檢測物；與血清外泌體微小RNA hsa?miR?219a?2?3p特異性結合的檢測物；與血清外泌體微小RNA hsa?miR?4661?5p特異性結合的檢測物。本發明通過抽取人的血液并對其中的血清外泌體hsa?miR?203b?5p、hsa?miR?219a?2?3p和hsa?miR?4661?5p進行測量就可以實現肝癌的無創、非侵襲性篩查或者診斷，操作簡單方便，具有較高特異性和敏感性。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，更具體地，涉及血清外泌體微小RNAs作為肝癌生物標志物在制備肝癌檢測試劑、肝癌檢測試劑盒或者肝癌檢測裝置中的應用，以及一種基于血清外泌體微小RNAs的肝癌檢測試劑盒。

背景技術

原發性肝癌是世界范圍內常見的高發病率、高致死率的惡性腫瘤之一，其中肝細胞性肝癌（簡稱肝癌，Hepatocellular Carcinoma，HCC）占原發性肝癌的85% ~ 90%以上。根據美國癌癥協會（ACS）2018年針對185個國家的36種癌癥統計，肝癌的新增病例數為84.1萬，位居全球第7位，死亡人數為78.2萬，位居全球第3位，其中，中國肝癌的新發病例及死亡病例均約占全球病例的一半，并且在全國新增癌癥病例中排名第4位，死亡病例中排名第2位。由于缺乏高效、靈敏和特異性強的肝癌早期檢測方法或技術，導致60% ~ 70%的肝癌患者診斷時已處于中晚期，從而錯失根治性切除機會。因此，肝癌的早期檢測、早期診斷和早期治療是提高肝癌患者生存率、降低肝癌死亡率最有效的途徑之一。

目前，臨床上應用比較成熟的肝癌早期檢測手段主要有依賴于影像學的檢測手段和腫瘤生物標志物的檢測手段等。在影像學檢測方面，雖然許多醫院和體檢機構等已經擁有較為精密的儀器設備，例如電腦斷層掃描，磁共振成像或者血管攝影等，但是影像學檢測一般價格比較昂貴并且具有放射性或者侵襲性等，從而難以實現全覆蓋式普及。在腫瘤生物標志物方面，主要有甲胎蛋白（AFP）、C反應性蛋白（CRP）和去羧凝血酶原（DCP）等，該類檢測手段雖然比較有效，具有無創、非侵襲性，但是，它們的檢測靈敏度和特異性比較差，其中，約有35% ~ 50%肝癌患者的AFP水平低于警戒值（20 ng/mL），而且，AFP在早期肝癌篩查中的檢出率僅為22%。因此，探究新型、高靈敏度、高特異性，并且價格低廉又易于檢測的肝癌早期診斷標志物具有重要的臨床意義。

微小RNAs（microRNAs，miRNAs）是一類內源性、非編碼、具有調控功能的單鏈小RNAs，長度約為18 ~ 25個核苷酸，miRNAs在腫瘤的發生與調控方面發揮著重要的作用。近年來，大量的研究發現，在人體血液、唾液和尿液等多種體液中能夠檢測到大量外泌體包裹的miRNAs，該類miRNAs具有組織、細胞特異性，并且與腫瘤的發生、發展、侵襲和轉移等密切相關。因此，外泌體miRNAs可以作為潛在的腫瘤生物標志物用于腫瘤的早期檢測或診斷。

發明內容

本發明的目的是提供新的可以作為潛在腫瘤生物標志物的外泌體miRNAs。本發明通過實驗研究發現，與健康人相比，肝癌患者血清外泌體hsa-miR-203b-5p、hsa-miR-219a-2-3p和hsa-miR-4661-5p均存在顯著性高表達（P0.05）。因此，基于這三種腫瘤生物標記物的肝癌診斷或篩查具有重要的臨床意義。

具體地，本發明的第一方面提供血清外泌體微小RNAs作為肝癌生物標志物在制備肝癌檢測試劑、肝癌檢測試劑盒或者肝癌檢測裝置中的應用，其中，所述血清外泌體微小RNAs為以下三種微小RNA的組合：hsa-miR-203b-5p、hsa-miR-219a-2-3p和hsa-miR-4661-5p。