[發(fā)明專利]一種加強(qiáng)胞內(nèi)丙酰輔酶A代謝提高甾藥前體生產(chǎn)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010630852.4
• 申請(qǐng)日: 2020-07-03
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111690586B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 申雁冰;王敏;周秀玲;張揚(yáng);張曉;夏夢(mèng)雷;駱健美
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/52;C12N15/61;C12P33/00;C12R1/32
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11617
• 代理人: 栗華楠

1.一種甾藥前體生產(chǎn)菌，其特征在于，是通過(guò)在分枝桿菌(Mycobacterium?neoaurum)MNRM3中表達(dá)PCCB編碼基因的同時(shí)，敲除表達(dá)PCCD的基因來(lái)構(gòu)建的；

表達(dá)PCCB的基因?yàn)閜ccB，核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO:3所示；表達(dá)PCCD的基因?yàn)閜ccD，核苷酸序列如序列表SEQ?ID?NO:13所示。

2.如權(quán)利要求1所述的一種甾藥前體生產(chǎn)菌，其特征在于，基因表達(dá)采用的表達(dá)載體為質(zhì)粒pMV261。

3.如權(quán)利要求1所述的一種甾藥前體生產(chǎn)菌，其特征在于，利用敲除載體對(duì)PCCD編碼基因進(jìn)行敲除。

4.權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述甾藥前體生產(chǎn)菌在生產(chǎn)甾藥前體中的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，在生產(chǎn)雄甾-4-烯-3,17-二酮中的應(yīng)用具體如下：

將甾藥前體生產(chǎn)菌種子培養(yǎng)液以2-10％的接種量轉(zhuǎn)接于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在25-35℃，50-200rpm條件下培養(yǎng)24-168h；

發(fā)酵培養(yǎng)基組成：K₂HPO₄?0.1-3g/L，MgSO₄?0.1-3g/L，檸檬酸鐵銨0.01-0.2g/L，檸檬酸1-5g/L，磷酸氫二銨1-10g/L，葡萄糖5-50g/L，植物甾醇1-50g/L，其余為水，pH?6.0-7.5。