[發明專利]轉氨酶及其在制備(R)-α-甲基色胺類化合物的應用

在審

• 申請號: 202010630461.2
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN113862234A
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發明（設計）人: 馮慶梅;焦琦;丁少南;程占冰;田振華;張濤;肖宇
• 申請（專利權）人: 弈柯萊生物科技（上海）股份有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P41/00;C12P17/10;C12R1/19
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛彬;黃益澍

1.一種轉氨酶，其特征在于，所述轉氨酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種分離的核酸，其特征在于，其編碼如權利要求1所述的轉氨酶。

3.一種包含如權利要求2所述的核酸的重組表達載體。

4.如權利要求3所述的重組表達載體，其特征在于，所述重組表達載體的骨架為質粒pET21a。

5.一種包含如權利要求2所述的核酸或如權利要求3或4所述的重組表達載體的轉化體。

6.如權利要求5所述的轉化體，其特征在于，所述轉化體的宿主為大腸桿菌；優選大腸桿菌BL21(DE3)。

7.一種(R)-α-甲基色胺類化合物的制備方法，其特征在于，其包括在氨基供體存在時，在反應溶劑中用如權利要求1所述的轉氨酶催化如式I所示的3-吲哚基丙酮類化合物得(R)-α-甲基色胺類化合物的步驟，所述的如式I所示的3-吲哚基丙酮類化合物為：

其中，R¹、R²、R³獨立地為H、OH、C₁～C₃的烷基或C₁～C₃的烷氧基。

8.如權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述反應溶劑為水；

和/或，所述的3-吲哚基丙酮類化合物為經過助溶劑助溶的3-吲哚基丙酮類化合物，所述助溶劑優選自DMSO、N,N二甲基甲酰胺、乙醇、異丙醇吐溫-80和吐溫-60中的一種或多種；所述助溶劑優選占所述制備方法的反應體系的總體積的0～20％；

和/或，所述的氨基供體為異丙胺或其鹽，所述的鹽優選為異丙胺鹽酸鹽；

和/或，所述制備方法的反應體系中還包括轉氨酶的輔助因子例如吡哆醛磷酸，所述轉氨酶的輔助因子與所述如式I所示的3-吲哚基丙酮類化合物的質量比為1:1000～1:10，優選為1:100；

和/或，所述的式I中，所述的C₁～C₃的烷基為甲基、乙基、正丙基或異丙基，所述的C₁～C₃的烷氧基為甲氧基、乙氧基、正丙氧基或異丙氧基；

較佳地，所述的如式I所示的3-吲哚基丙酮類化合物為下述任一化合物：

9.如權利要求7或8所述的制備方法，其特征在于，所述氨基供體與所述3-吲哚基丙酮類化合物的摩爾比為1:1～6:1，例如3:1～6:1；

和/或，所述3-吲哚基丙酮類化合物的濃度為10g/L～50g/L，優選為15～34g/L，例如19g/L；

和/或，所述轉氨酶與所述3-吲哚基丙酮類化合物的質量比為6:1～12:1，例如為9:1；

和/或，所述反應的pH為7.5-8.5，例如為8；

和/或，所述反應的溫度為35-45℃。

10.一種如權利要求1所述的轉氨酶在制備(R)-α-甲基色胺類化合物中的用途；

較佳地，所述用途包括在氨基供體例如異丙胺或其鹽存在時，在反應溶劑中用如權利要求1所述的轉氨酶催化如式I所示的3-吲哚基丙酮類化合物得(R)-α-甲基色胺類化合物的步驟，所述的如式I所示的3-吲哚基丙酮類化合物為：

其中，R¹、R²、R³獨立地為H、OH、C₁～C₃的烷基或C₁～C₃的烷氧基；

更佳地，所述的式I中，所述的C₁～C₃的烷基為甲基、乙基、正丙基或異丙基，所述的C₁～C₃的烷氧基為甲氧基、乙氧基、正丙氧基或異丙氧基；

進一步更佳地，所述的如式I所示的化合物為下述任一化合物：