[發明專利]一種荸薺品種鑒定專用引物及其荸薺品種鑒定方法

有效

• 申請號: 202010630352.0
• 申請日: 2020-07-02
• 公開（公告）號: CN111549174B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 江文;高美萍;黃誠梅;陳麗娟;蔡炳華
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京卓嵐智財知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11624
• 代理人: 任漱晨

1.一種荸薺品種鑒定專用引物的荸薺品種鑒定方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：

步驟1：建立PCR的ISSR擴增體系和ISSR反應程序；

步驟2：對待測的荸薺品種進行DNA提取，荸薺品種包括番禺地方種、桂蹄2號和桂蹄3號；

步驟3：使用荸薺品種鑒定專用引物以提取的DNA為模板，進行PCR擴增，

所述引物序列為AGAGAGAGAGAGAGAGYC；

步驟4：配制含有0.01％核酸凝膠熒光染料GelRed的1.5％瓊脂糖凝膠，取PCR擴增產物于1×TBE緩沖液中電泳，待溴酚蘭遷移至瓊脂糖凝膠的2/3處，取出膠，而后清水漂洗，放在自動凝膠成像儀中觀察、拍照記錄。

2.根據權利要求1所述的一種荸薺品種鑒定專用引物的荸薺品種鑒定方法，其特征在于：所述步驟1中20.0μl的ISSR擴增體系包括14.7μl ddH₂O、2.0μl10×Ex Taq buffer、1.6μl dNTP、0.5μl權利要求1所述的專用引物、0.2μl Ex Taq DNA polymerase和1.0μlGenomic DNA。

3.根據權利要求2所述的一種荸薺品種鑒定專用引物的荸薺品種鑒定方法，其特征在于：所述dNTP為2.5mmol/L，所述權利要求1所述的專用引物為10μmol/L，所述Ex Taq DNApolymerase為5U/μl，所述Genomic DNA為80ng/μl。

4.根據權利要求3所述的一種荸薺品種鑒定專用引物的荸薺品種鑒定方法，其特征在于：所述步驟1中ISSR反應程序包括預變性94℃4min；40個循環，94℃30sec，50-54℃40sec，72℃90sec；72℃7min；最終4℃保存。

5.根據權利要求4所述的一種荸薺品種鑒定專用引物的荸薺品種鑒定方法，其特征在于：所述步驟4中取7μl擴增產物于1×TBE緩沖液中電泳，電泳的電壓為5v/cm。