[發明專利]一種O型口蹄疫亞單位疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010630218.0
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN111773383B
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 茹毅;劉華南;張貴財;楊帆;李丹;郭建宏;何繼軍;張嬌燕;李亞軍;馬坤;伍春平;郝榮增;田宏;張克山;曹偉軍;馬旭升;黨文;靳野
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: A61K39/135
• 分類號: A61K39/135;A61K39/39;A61P31/14;C07K19/00;C07K1/22;C12N15/62;C12N15/70
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 戴治娟

1.一種根據O型口蹄疫病毒株O/17002結構蛋白VP0、VP3和VP1的序列制備獲得的O型口蹄疫疫苗，其特征在于，所述O/17002結構蛋白VP0的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述O/17002結構蛋白VP3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述O/17002結構蛋白VP1的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

2.一種O型口蹄疫病毒結構蛋白組合物，其特征在于，所述O型口蹄疫病毒結構蛋白組合物由病毒三種結構蛋白VP0、VP3和VP1組成，所述結構蛋白VP0的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，所述結構蛋白VP3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述結構蛋白VP1的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。

3.如權利要求2所述的O型口蹄疫病毒結構蛋白組合物，其特征在于，所述編碼結構蛋白VP0的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，編碼結構蛋白VP3的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，編碼結構蛋白VP1的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

4.如權利要求2所述的O型口蹄疫病毒結構蛋白組合物，其特征在于，將所述結構蛋白VP3的118位賴氨酸突變為精氨酸，所述突變后的結構蛋白VP3的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；和/或將所述結構蛋白VP1的210位賴氨酸突變為精氨酸，所述突變后的結構蛋白VP1的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。

5.如權利要求4所述的O型口蹄疫病毒結構蛋白組合物，其特征在于，所述編碼突變后的結構蛋白VP3的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述編碼突變后的結構蛋白VP1的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

6.如權利要求2-5任一所述的O型口蹄疫病毒結構蛋白組合物在制備口蹄疫疫苗中的應用。

7.一種用于預防口蹄疫病毒感染的疫苗，其特征在于，所述疫苗包括權利要求2-5任一所述的口蹄疫病毒結構蛋白組合物。

8.如權利要求7所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗還包括佐劑。

9.如權利要求8所述的疫苗，其特征在于，所述佐劑為化學類免疫佐劑、微生物類免疫佐劑、植物類免疫佐劑、生化類免疫佐劑中的一種或幾種。

10.一種O型口蹄病毒結構蛋白組合物的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)設計編碼融合標簽蛋白基因序列THS，其中T為翻譯起始區核苷酸序列，H為編碼含組氨酸標簽的核苷酸序列，S為編碼含釀酒酵母小泛素樣修飾蛋白(SUMO)的核苷酸序列；

(2)將步驟(1)所述的融合標簽蛋白基因序列THS分別與編碼O型口蹄疫流行毒株結構蛋白VP0、VP3和VP1的基因串聯，形成三段融合目標蛋白基因序列THS-VP0、THS-VP3和THS-VP1；所述結構蛋白VP0的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，結構蛋白VP3的氨基酸序列如SEQID NO.3所示，結構蛋白VP1的氨基酸序列SEQ ID NO.5所示；

(3)通過分子克隆技術將步驟(2)所述三段融合目標蛋白基因序列同時克隆入原核表達載體pET30a，獲得重組表達質粒pET-FMDV-VP031；

(4)將步驟(3)所述的重組表達質粒pET-FMDV-VP031轉化大腸桿菌，獲得基因工程菌，將所述基因工程菌進行發酵培養，誘導表達帶有融合標簽蛋白的口蹄疫病毒結構蛋白VP0、VP3和VP1；

(5)破碎基因工程菌菌體后，回收上清液，親和色譜層析分離純化獲得帶有融合標簽蛋白的口蹄疫病毒結構蛋白VP0，VP3和VP1混合物；

(6)酶切去除步驟(5)所述混合物中的融合標簽蛋白后，再用親和色譜層析分離純化獲得口蹄疫病毒結構蛋白VP0，VP3和VP1混合物。