[發明專利]一種含有IRES-S1-N基因的重組病毒及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010628618.8
• 申請日: 2020-07-02
• 公開（公告）號: CN111690621A
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 胡海霞;于慶忠;黎曉敏;陳脊宇;張菊;田思思;路金金;馬詩琳;謝東圣;何文淼
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/50;C12N15/86;A61K39/295;A61K39/17;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 郭艷艷

1.一種含有IRES-S1-N基因的重組病毒，其特征在于，所述重組病毒包括插入有IRES和S1-N基因的新城疫病毒弱毒株LaSota基因組，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種構建權利要求1所述重組病毒的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取新城疫病毒弱毒株LaSota全長基因組RNA；

(2)分別用三對特異性引物對步驟(1)提取得到的RNA進行RT-PCR，獲得3個cDNA片段，然后再將3個cDNA片段連接到pBluescript載體上，構建得到pFLC-LaSota重組質粒；

(3)分別構建含有新城疫病毒NP、P和L的輔助質粒pTM-NP、pTM-P和pTM-L；

(4)將pFLC-LaSota載體線性化，然后再在其上連接IRES基因和S1-N基因，然后將其與步驟(3)構建的輔助質粒共轉染細胞，即可獲得含有IRES-S1-N的重組病毒。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述pBluescript載體中含有T7啟動子。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述三對特異性引物分別為LS-F1-F和LS-F1-R、LS-F2-F和LS-F2-R，以及LS-F3-F和LS-F3-R。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中RT-PCR體系為：1μL RNA、12.5μL 2×Buffer、0.5μL上游引物、0.5μL下游引物、1μL RT-PCR酶，最后用DEPC水補足至25μL。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中RT-PCR反應程序為：50℃，反轉錄30min；94℃，預變性2min；94℃，變性30s；50℃，退火30s；72℃，延伸5.5min；共35個循環，最后72℃終末延伸10min。

7.權利要求1所述的含有IRES-S1-N基因的重組病毒在制備新城疫和/或雞傳染性支氣管炎疫苗中的應用。

8.權利要求1所述的含有IRES-S1-N基因的重組病毒在制備抗新城疫和/或雞傳染性支氣管炎藥物中的應用。