[發明專利]小細胞肺癌患者外周血循環腫瘤細胞E-Cadherin突變的免疫熒光試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010627923.5
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111638358A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 洪瑛;侯景陽;李文濤;李琛琛
• 申請（專利權）人: 山東凱歌智能機器有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/574;G01N33/569;B01D29/05
• 代理公司: 暫無信息
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本發明提供了一種小細胞肺癌患者外周血循環腫瘤細胞E?Cadherin突變的免疫熒光試劑盒及方法，屬于分子生物學技術領域。該試劑盒包括稀釋液45mL、脫色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、甲醇200μl、2%PFA 200μl、10%山羊血清100μl、一抗工作液100μl、二抗工作液100μl、DAPI封片劑。本發明提供的檢測方法，不用穿刺活檢獲取組織標本即可檢測到晚期或復發小細胞肺癌患者E?Cadherin表達情況。該技術屬于微創，并能夠實時檢測。本發明提供的方法，能夠避免染色過程中可能產生的邊緣效應導致的假陽性結果，穩定性好，降低細胞的損失，提高檢測的準確性。

技術領域

本發明提供了一種檢測小細胞肺癌患者外周血循環腫瘤細胞E-Cadherin基因突變的免疫熒光試劑盒及檢測方法，屬于分子生物學技術領域。

背景技術

肺癌是導致癌癥患者死亡的主要惡性腫瘤之一，在我國，肺癌的發病率和死亡率均居第一位。小細胞肺癌 （small cell lung cancer，SCLC）約占肺癌發生率的15％～20％，相較非小細胞肺癌，具有更快的腫瘤倍增時間，快速生長以及易于早期轉移的特點。

循環腫瘤細胞（Circulating tumor cell，CTC）是從實體腫瘤脫落進入外周血液循環的腫瘤細胞，自1989年被發現以來，目前已有多種方法用于外周血循環腫瘤細胞的檢測。近期研究表明，其檢測對于評估腫瘤患者尤其是晚期腫瘤患者的預后以及選擇合適的個體化治療具有重要的臨床意義。因CTC檢測具有微創、實時檢測等特點，被稱為腫瘤的“液態活檢”。

目前，山東省第一醫科大學、山東省藥物研究院聯合山東凱歌智能機器有限公司就循環腫瘤細胞檢測鑒定關鍵技術、檢測設備、試劑盒開發與生產進行合作，山東祺欣生物科技有限公司、山東喻曉生物科技有限公司、濟南杏恩生物科技有限公司、山東發現生物技術有限公司等單位進行推廣應用，本項目為山東省重大科技創新工程項目，以山東第一醫科大學濟南校區的山東省藥物研究院為核心，落實注冊人制度，依托循環腫瘤細胞檢測鑒定核心診斷技術，進一步注冊鑒定診斷試劑盒，以包括PD1、PD-L1、ER、PR、Her-2、GPC-3、VEGF、P53、Vimentin、TKI-EGFR、RAS、CK、ALK-D5F3、CD20、ALK/EML4、Beta-catenin、E-Cadherin、EP-CAM、HPV、IDH-1、PSA、PSMA、VEGF、GFAP、細胞角蛋白、AE1/AE3、雌激素受體、孕激素受體、BCA-225、CA 125、CEA、EMA、ERCC1、HPV、Ki-67、P53、TOP2A等作為CTCs表達的示蹤劑，注冊超靈敏、超快速、高覆蓋、低成本、準確特異的鑒定診斷試劑盒，通過與在濟南注冊的山東凱歌智能機器有限公司、山東祺欣生物科技有限公司、山東喻曉生物科技有限公司、濟南杏恩生物科技有限公司、山東發現生物技術有限公司合作進行研發與推廣。

E-鈣粘蛋白(E-Cadherin)是上皮細胞表型最經典的標志物，E-Cadherin表達的下調標志著細胞之間粘附能力的下降，因此E-Cadherin被當做鑒定小細胞肺癌EMT發生的主要手段之一，作為一類細胞表面糖蛋白，E-Cadherein在細胞-細胞之間的粘附中發揮重要作用，并參與組織器官的維持。近年來有關于小細胞肺癌EMT和腫瘤耐藥之間的關系日益受到重視，大量研究顯示在不同的腫瘤當中由于EMT的發生而同時耐藥性的升高，并且都伴隨著E-Cadherin表達的改變。目前，國內外SCLC診治指南均認為：SCLC患者E-Cadherin突變檢測的時間點包括初診時及爭取在疾病進展時再次檢測，應通過重復檢測減少假陽性和假陰性。而目前臨床實踐中，SCLC患者E-Cadherin檢測的標本主要為腫瘤組織，來源于手術或穿刺活檢，很難做到多次或實時檢測。

發明內容