[發明專利]一種檢測胰腺癌患者外周血循環腫瘤細胞E-Cadherin表達的試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202010626819.4
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111856022A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 李琛琛;洪瑛;侯景陽;李文濤
• 申請（專利權）人: 山東凱歌智能機器有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/574;G01N33/569;B01D29/05
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種檢測胰腺癌患者外周血循環腫瘤細胞E?Cadherin表達的試劑盒及檢測方法，屬于分子生物學技術領域。所述的試劑盒，其特征在于，包括稀釋液45mL、脫色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、鼠抗人E?Cadherin一抗100μL、連接有辣根過氧化物酶的兔抗鼠IgG/HRP 100μL、0.1%Triton X?100 100μL、0.3%H₂O₂ 100μL、試劑A 15ml、試劑B 50ml、6×PBS緩沖液60mL。本發明的檢測方法，利用膜過濾裝置分離獲得無法獲取組織標本的晚期或復發胰腺癌患者外周血中的CTC，進一步運用免疫組化技術檢測CTC的E?Cadherin表達情況。

技術領域

本發明涉及一種檢測胰腺癌患者外周血循環腫瘤細胞E-Cadherin表達的試劑盒及檢測方法，屬于分子生物學技術領域。

背景技術

胰腺癌是消化系統常見的惡性腫瘤，也是預后最差的惡性腫瘤之一，在惡性腫瘤所導致的死亡中，胰腺癌排第四位，90％患者在確診后一年內死亡，5年生存率不足5％。由于胰腺癌早期癥狀隱匿，且沒有特異性，侵襲性強，轉移早，確診時多處于中晚期，手術切除率低，確診時候僅15％，因此對胰腺癌患者治療方法的選定顯得尤為重要，可以使部分患者避免不必要的手術創傷及風險。

E-鈣粘蛋白(E—Cadherin)是上皮細胞表型最經典的標志物，E-Cadherin表達的下調標志著細胞之間粘附能力的下降，因此E-Cadherin被當做鑒定胰腺癌EMT發生的主要手段之一，作為一類細胞表面糖蛋白，E-Cadherein在細胞-細胞之間的粘附中發揮重要作用，并參與組織器官的維持。近年來有關于胰腺癌EMT和腫瘤耐藥之間的關系日益受到重視，大量研究顯示在不同的腫瘤當中由于EMT的發生而同時耐藥性的升高，并且都伴隨著E-Cadherin表達的改變。而目前臨床實踐中，胰腺癌患者E-Cadherin檢測的標本主要為腫瘤組織，來源于手術或穿刺活檢，很難做到多次或實時檢測。

目前，山東省第一醫科大學、山東省藥物研究院聯合山東凱歌智能機器有限公司就循環腫瘤細胞檢測鑒定關鍵技術、檢測設備、試劑盒開發與生產進行合作，山東祺欣生物科技有限公司、山東喻曉生物科技有限公司、濟南杏恩生物科技有限公司、山東發現生物技術有限公司等單位進行推廣應用，本項目為山東省重大科技創新工程項目，以山東第一醫科大學濟南校區的山東省藥物研究院為核心，落實注冊人制度，依托循環腫瘤細胞檢測鑒定核心診斷技術，進一步注冊鑒定診斷試劑盒，以包括PD1、PD-L1、ER、PR、Her-2、GPC-3、VEGF、P53、Vimentin、TKI-EGFR、RAS、CK、ALK-D5F3、CD20、ALK/EML4、Beta-catenin、E-Cadherin、EP-CAM、HPV、IDH-1、PSA、PSMA、VEGF、GFAP、細胞角蛋白、AE1/AE3、雌激素受體、孕激素受體、BCA-225、CA 125、CEA、EMA、ERCC1、HPV、Ki-67、P53、TOP2A等作為CTCs表達的示蹤劑，注冊超靈敏、超快速、高覆蓋、低成本、準確特異的鑒定診斷試劑盒，通過與在濟南注冊的山東凱歌智能機器有限公司、山東祺欣生物科技有限公司、山東喻曉生物科技有限公司、濟南杏恩生物科技有限公司、山東發現生物技術有限公司合作進行研發與推廣。

發明內容

為了克服多次或實時檢測的問題，同時避免穿刺活檢面臨出血、胰瘺、感染等風險，本發明提供了一種檢測胰腺癌患者外周血循環腫瘤細胞E-Cadherin表達的試劑盒及檢測方法，利用膜過濾裝置分離獲得無法獲取組織標本的晚期或復發胰腺癌患者外周血中的CTC，進一步運用免疫組化技術檢測CTC的E-Cadherin表達情況。

本發明采用的技術方案如下：