[發明專利]一種檢測乳腺癌患者外周血循環腫瘤細胞E-Cadherin表達的試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202010626562.2
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111638355A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 侯景陽;李文濤;李琛琛;洪瑛
• 申請（專利權）人: 山東凱歌智能機器有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/574;G01N33/569;B01D29/05
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本發明涉及一種檢測乳腺癌患者外周血循環腫瘤細胞E?Cadherin表達的試劑盒及檢測方法，屬于分子生物學技術領域。所述的試劑盒，包括稀釋液45mL、脫色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、鼠抗人E?Cadherin一抗100μL、連接有辣根過氧化物酶的兔抗鼠IgG/HRP 100μL、0.1%Triton X?100 100μL、0.3%H₂O₂100μL、試劑A 15ml、試劑B 50ml、6×PBS緩沖液60mL。本發明的檢測方法是利用膜過濾裝置分離獲得無法獲取組織標本的晚期或復發乳腺癌患者外周血中的CTC，進一步運用免疫組化技術檢測CTC的E?Cadherin表達情況。

技術領域

本發明涉及一種檢測乳腺癌患者外周血循環腫瘤細胞E-Cadherin表達的試劑盒及檢測方法，屬于分子生物學技術領域。

背景技術

乳腺癌是嚴重威脅女性健康的惡性腫瘤之一，并且發病率呈逐年上升的趨勢。乳腺癌術后復發轉移導致的死亡位居中國和美國女性癌癥死因的第6位和第2位，是乳腺癌治療失敗的主要原因。因此，對乳腺癌術后轉移的治療關鍵在于利用有效的檢查技術及時準確的做出診斷?？乖[瘤標志物檢測具有簡便快捷、對患者造成的創傷和損害小等優勢，對乳腺癌的發生、發展、治療及預后具有重要的臨床意義。

E-鈣粘蛋白(E—Cadherin)是上皮細胞表型最經典的標志物，表達于絕大多數上皮細胞表面，尤以細胞連接處最為集中，是上皮細胞表面最重要的細胞間粘附分子之一。它通過介導細胞間的粘附反應，維持上皮組織結構的完整性和細胞的極性，具有細胞接觸性生長抑制功能，防止細胞的相互分離。E-Cadherin是典型的某些類型腫瘤形成/浸潤抑制因子，E-Cadherin的檢測對于檢測乳腺癌轉移及復發具有重要意義。而目前臨床實踐中，乳腺癌患者E-Cadherin檢測的標本主要為腫瘤組織，來源于手術或穿刺活檢，很難做到多次或實時檢測。

目前，山東省第一醫科大學、山東省藥物研究院聯合山東凱歌智能機器有限公司就循環腫瘤細胞檢測鑒定關鍵技術、檢測設備、試劑盒開發與生產進行合作，山東祺欣生物科技有限公司、山東喻曉生物科技有限公司、濟南杏恩生物科技有限公司、山東發現生物技術有限公司等單位進行推廣應用，本項目為山東省重大科技創新工程項目，以山東第一醫科大學濟南校區的山東省藥物研究院為核心，落實注冊人制度，依托循環腫瘤細胞檢測鑒定核心診斷技術，進一步注冊鑒定診斷試劑盒，以包括PD1、PD-L1、ER、PR、Her-2、GPC-3、VEGF、P53、Vimentin、TKI-EGFR、RAS、CK、ALK-D5F3、CD20、ALK/EML4、Beta-catenin、E-Cadherin、EP-CAM、HPV、IDH-1、PSA、PSMA、VEGF、GFAP、細胞角蛋白、AE1/AE3、雌激素受體、孕激素受體、BCA-225、CA 125、CEA、EMA、ERCC1、HPV、Ki-67、P53、TOP2A等作為CTCs表達的示蹤劑，注冊超靈敏、超快速、高覆蓋、低成本、準確特異的鑒定診斷試劑盒，通過與在濟南注冊的山東凱歌智能機器有限公司、山東祺欣生物科技有限公司、山東喻曉生物科技有限公司、濟南杏恩生物科技有限公司、山東發現生物技術有限公司合作進行研發與推廣。

發明內容

為了克服多次或實時檢測的問題，同時避免穿刺活檢面臨出血、胰瘺、感染等風險，本發明提供了一種檢測乳腺癌患者外周血循環腫瘤細胞E-Cadherin表達的試劑盒及檢測方法，利用膜過濾裝置分離獲得無法獲取組織標本的晚期或復發乳腺癌患者外周血中的CTC，進一步運用免疫組化技術檢測CTC的E-Cadherin表達情況。

本發明采用的技術方案如下：