[發(fā)明專利]基于POCT的熒光定量PCR儀校準方法及PCR儀

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010626282.1
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111926064A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 熊偉;向·霄;黃自桂;張東濤;黃東旗
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶京因生物科技有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12M1/38;C12M1/34;C12M1/24;C12M1/00
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

1.一種基于POCT的熒光定量PCR儀校準方法，其特征在于，所述熒光定量PCR儀包括：

試管架，所述試管架上設(shè)置有若干孔位；

試劑管，對應(yīng)設(shè)置于所述試管架的孔位內(nèi)，用于盛放標準品；

光源模塊，對應(yīng)每個孔位，設(shè)置于所述試管架的側(cè)部；

采集模塊，設(shè)置于所述試管架的底部；

所述校準方法包括如下步驟：

將放置有所述試劑管的孔位標記為至少一個基準孔和若干測試孔；

驅(qū)動所述光源模塊朝向?qū)?yīng)的所述試劑管發(fā)射激發(fā)光；

通過所述采集模塊采集所述試劑管被激發(fā)光照射時的圖像，并提取圖像的灰度值；

根據(jù)基準孔和測試孔將提取到圖像的灰度值分為基準孔灰度值和測試孔灰度值；

根據(jù)基準孔的基準孔灰度值和各測試孔的測試孔灰度值，計算得到各測試孔的校準系數(shù)；

根據(jù)各測試孔的測試孔灰度值和各測試孔的校準系數(shù)，計算得到各測試孔校準后的測試孔灰度值。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于POCT的熒光定量PCR儀校準方法，其特征在于，所述將放置有所述試劑管的孔位標記為至少一個基準孔和若干測試孔的步驟之前，還包括：

將所述試劑管分為盛放染料標準品的第一試管和盛放純水標準品的第二試管，并將所述第一試管和所述第二試管放入所述試管架的孔位內(nèi)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種基于POCT的熒光定量PCR儀校準方法，其特征在于，驅(qū)動所述光源模塊朝向?qū)?yīng)的所述試劑管發(fā)射激發(fā)光的步驟中，具體包括：

驅(qū)動所述光源模塊朝向所述第一試管發(fā)射激發(fā)光，以激發(fā)所述第一試管內(nèi)盛放的染料標準品發(fā)出熒光；

驅(qū)動所述光源模塊朝向所述第二試管發(fā)射激發(fā)光，以激發(fā)所述第二試管內(nèi)盛放的純水標準品發(fā)出反射光。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于POCT的熒光定量PCR儀校準方法，其特征在于，通過所述采集模塊采集所述試劑管被激發(fā)光照射時的圖像，并提取圖像的灰度值的步驟中，具體包括：

通過所述采集模塊采集所述第一試管被激發(fā)光照射時的圖像，并提取圖像的灰度值，得到該孔位的孔位灰度值；

通過所述采集模塊采集所述第二試管被激發(fā)光照射時的圖像，并提取圖像的灰度值，得到該孔位的反射光灰度值。

5.根據(jù)權(quán)利要求2-4任一所述的一種基于POCT的熒光定量PCR儀校準方法，其特征在于，所述根據(jù)基準孔和測試孔將提取到圖像的灰度值分為基準孔灰度值和測試孔灰度值的步驟之前，還包括：

將全部所述試劑管沿孔位的正向或反向調(diào)整至相鄰的孔位后，執(zhí)行所述光源模塊發(fā)射激發(fā)光和所述采集模塊采集圖像的步驟；

重復上述步驟，直至每一個孔位將全部所述試劑管在該孔位的圖像采集完畢。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種基于POCT的熒光定量PCR儀校準方法，其特征在于，所述根據(jù)基準孔和測試孔將提取到圖像的灰度值分為基準孔灰度值和測試孔灰度值的步驟中，具體包括：

逐一將各孔位提取到的所有所述第一試管的孔位灰度值求和并取平均值，得到各孔位的孔位平均灰度值；

根據(jù)基準孔和測試孔，將孔位平均灰度值分為基準孔平均灰度值和測試孔平均灰度值；

逐一將各孔位提取到的所有所述第二試管在每個孔位的反射光灰度值求和并取平均值，得到各孔位的平均反射光灰度值；

根據(jù)基準孔和測試孔，將孔位的平均灰度值分為基準孔平均反射光灰度值和測試孔平均反射光灰度值。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種基于POCT的熒光定量PCR儀校準方法，其特征在于，所述根據(jù)基準孔的基準孔灰度值和各測試孔的測試孔灰度值，計算得到各測試孔的校準系數(shù)的步驟中，具體包括：

對基準孔提取到的基準孔平均灰度值和各測試孔提取到的測試孔平均灰度值進行降噪處理；

其中，所述降噪處理包括將基準孔提取到的基準孔平均灰度值減去基準孔平均反射光灰度值得到基準孔熒光灰度值；將各測試孔提取到的測試孔平均灰度值減去對應(yīng)孔位的測試孔平均反射光灰度值得到測試孔熒光灰度值；

根據(jù)基準孔的基準孔熒光灰度值與各測試孔的測試孔熒光灰度值，計算得到各測試孔的校準系數(shù)。