[發明專利]靶向RBD的高中和活性抗SARS-CoV-2全人源單克隆抗體及應用

有效

• 申請號: 202010625226.6
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111732655B
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 陳薇;李建民;遲象陽;張軍;付玲;于長明;徐俊杰;侯利華;張冠英;范鵬飛;郝勐;董韻竹;宋小紅;陳旖;張金龍;房婷;劉樹玲;呂鵬;于婷
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;C12N15/85;C12N5/10;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 北京市眾天律師事務所 11478
• 代理人: 李新軍

本發明公開了一種靶向RBD的高中和活性抗SARS?CoV?2全人源單克隆抗體，所述抗體通過流式分選?單細胞PCR技術篩選獲得，具有獨特的CDR序列，本發明還公開了所述抗體在制備2019?冠狀病毒病治療藥物中的應用。本發明公開的單克隆抗體具有高效、特異的抗SARS?COV?2病毒活性，還具有高表達、全人源、穩定性好的特點，適合產業化生產。

技術領域

本發明公開了一種抗體，屬于微生物學和免疫學領域。

背景技術

目前，已知引起人致病的冠狀病毒包括7種，其中HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63和HCoV-HKU1致病性較低，一般引起輕微的呼吸道癥狀。另外三種引起嚴重的疾病。SARS-CoV引起嚴重呼吸窘迫綜合征(SARS)，MERS冠狀病毒引起中東呼吸綜合征，SARS-CoV-2(新型冠狀病毒)引起COVID-19(新冠肺炎)。

SARS-CoV-2屬冠狀病毒科(Coro-naviridae)冠狀病毒屬(Coronavirus)，是一類有包膜的單股正鏈RNA病毒。基因組全長為30kb，依次由5＇-端非編碼區、非結構蛋白開放閱讀框(ORF)1a/b編碼區、刺突糖蛋白S編碼區、包膜蛋白E編碼區、膜蛋白M蛋白編碼區、核衣殼蛋白N蛋白編碼區及3＇-端非編碼區組成。其中，非結構蛋白ORF1a/b區編碼的聚蛋白可被切割，形成RNA依賴的RNA聚合酶(RdRp)等，指導病毒基因組復制、轉錄和翻譯。結構蛋白S可特異性地與宿主細胞的受體結合，是病毒入侵宿主易感細胞的關鍵蛋白。不同冠狀病毒可利用不同的細胞受體來完成入侵，如SARS-CoV的受體是血管緊張素轉化酶2(ACE2)，而MERS-CoV的受體是氨基肽酶4(DPP4，也稱CD26)。研究證明，氨肽酶N不是SARS-CoV-2的受體，而ACE2可作為其受體。

基因測序結果顯示，SARS-CoV-2與SARS-CoV的同源性約79％,與MERS-CoV的同源性約50％。文獻報道，新型冠狀病毒S蛋白ACE2親和力較SARS-COV強，提示具有更強的傳染性。到目前為止，還沒有專門用于預防的疫苗和治療冠狀病毒的特效藥物。一般采用非特異性治療，預防嚴重的并發癥，降低重癥發病率和病死率，提高治愈率。研發新型冠狀病毒病的疫苗和特異治療藥物成為全球應急科研攻關的重要任務。

新冠肺炎治療方法中，康復者血漿療法在治療重癥患者中顯示了良好的效果，提示抗體在治療新冠肺炎上的巨大潛力。單克隆抗體成分單一、易規模化制備、抗病毒機制明確，是新冠肺炎治療藥物研究的重要方向。本發明擬采用單細胞PCR技術從SARS-CoV-2感染者恢復后的外周血中獲得具有高親和力和優異中和活性的單克隆抗體，目的是提供針對COVID-19具有良好保護效果的全人源單克隆治療性抗體。

發明內容

基于上述發明目的，本發明通過流式分選-單細胞PCR技術篩選到了一種抗SARS-CoV-2的單克隆抗體，所述單克隆抗體的重鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3區的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:1第26-33、51-58、97-111位氨基酸序列所示；輕鏈可變區的CDR1、CDR2和CDR3區的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:5第27-35、52-54、91-100位氨基酸序列所示。所述單克隆抗體在本申請中被命名為“4B7”。

在一個優選的實施方案中，所述抗體的重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。

在一個更為優選的實施方案中，所述抗體的重鏈恒定區的氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示，所述輕鏈恒定區的氨基酸序列如SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:9所示。

第二，本發明還提供了一種編碼上述單克隆抗體重鏈和輕鏈的多核苷酸，編碼所述抗體的重鏈可變區的多核苷酸序列由SEQ ID NO:2所示，編碼所述抗體的輕鏈可變區的多核苷酸序列由SEQ ID NO:6所示。