[發(fā)明專利]一種檢測乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細胞BCA-225表達的試劑盒及檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010624974.2
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111638339A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發(fā)明（設計）人: 洪瑛;侯景陽;李文濤;李琛琛
• 申請（專利權）人: 山東凱歌智能機器有限公司
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/569;B01D29/05
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種檢測乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細胞BCA?225表達的試劑盒及檢測方法，屬于分子生物學技術領域。試劑盒包括稀釋液45mL、脫色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、鼠抗人BCA?225一抗100μL、兔抗鼠IgG/HRP 100μL、0.1%Triton X?100 100μL、0.3%H₂O₂ 100μL、試劑A 15ml、試劑B 50ml、6×PBS緩沖液60mL。檢測方法是利用膜過濾裝置分離獲得無法獲取組織標本的晚期或復發(fā)乳腺癌患者外周血中的CTC，進一步運用免疫組化技術檢測CTC的BCA?225表達情況。

技術領域

本發(fā)明涉及一種檢測乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細胞BCA-225表達的試劑盒及檢測方法，屬于分子生物學技術領域。

背景技術

乳腺癌是嚴重威脅女性健康的惡性腫瘤之一，并且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。乳腺癌術后復發(fā)轉(zhuǎn)移導致的死亡位居中國和美國女性癌癥死因的第6位和第2位，是乳腺癌治療失敗的主要原因。因此，對乳腺癌術后轉(zhuǎn)移的治療關鍵在于利用有效的檢查技術及時準確的做出診斷。抗原腫瘤標志物檢測具有簡便快捷、對患者造成的創(chuàng)傷和損害小等優(yōu)勢，對乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、治療及預后具有重要的臨床意義。

乳腺癌抗原225(breast cancer antigen-225，BCA-225)是最早于乳腺癌細胞株T47D中檢測到的一種分泌性糖蛋白，分子量為225KDa，通常乳腺腺癌細胞表達此種蛋白，BCA-225的檢測對于檢測乳腺癌轉(zhuǎn)移及復發(fā)具有重要意義。而目前臨床實踐中，乳腺癌患者BCA-225檢測的標本主要為腫瘤組織，來源于手術或穿刺活檢，很難做到多次或?qū)崟r檢測。

目前，山東省第一醫(yī)科大學、山東省藥物研究院聯(lián)合山東凱歌智能機器有限公司就循環(huán)腫瘤細胞檢測鑒定關鍵技術、檢測設備、試劑盒開發(fā)與生產(chǎn)進行合作，山東祺欣生物科技有限公司、山東喻曉生物科技有限公司、濟南杏恩生物科技有限公司、山東發(fā)現(xiàn)生物技術有限公司等單位進行推廣應用，本項目為山東省重大科技創(chuàng)新工程項目，以山東第一醫(yī)科大學濟南校區(qū)的山東省藥物研究院為核心，落實注冊人制度，依托循環(huán)腫瘤細胞檢測鑒定核心診斷技術，進一步注冊鑒定診斷試劑盒，以包括PD1、PD-L1、ER、PR、Her-2、GPC-3、VEGF、P53、Vimentin、TKI-EGFR、RAS、CK、ALK-D5F3、CD20、ALK/EML4、Beta-catenin、E-Cadherin、EP-CAM、HPV、IDH-1、PSA、PSMA、VEGF、GFAP、細胞角蛋白、AE1/AE3、雌激素受體、孕激素受體、BCA-225、CA 125、CEA、EMA、ERCC1、HPV、Ki-67、P53、TOP2A等作為CTCs表達的示蹤劑，注冊超靈敏、超快速、高覆蓋、低成本、準確特異的鑒定診斷試劑盒，通過與在濟南注冊的山東凱歌智能機器有限公司、山東祺欣生物科技有限公司、山東喻曉生物科技有限公司、濟南杏恩生物科技有限公司、山東發(fā)現(xiàn)生物技術有限公司合作進行研發(fā)與推廣。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服多次或?qū)崟r檢測的問題，同時避免穿刺活檢面臨出血、胰瘺、感染等風險，本發(fā)明提供了一種檢測乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細胞BCA-225表達的試劑盒及檢測方法，利用膜過濾裝置分離獲得無法獲取組織標本的晚期或復發(fā)乳腺癌患者外周血中的CTC，進一步運用免疫組化技術檢測CTC的BCA-225表達情況。

本發(fā)明采用的技術方案如下：

一種檢測乳腺癌患者外周血循環(huán)腫瘤細胞BCA-225表達的試劑盒，包括稀釋液45mL、脫色液1mL、染色液A 0.5mL、染色液B 1mL、鼠抗人BCA-225一抗100μL、兔抗鼠IgG/HRP 100μL、0.1% Triton X-100 100μL、0.3% H₂O₂ 100μL、試劑A 15ml、試劑B 50ml、6×PBS緩沖液60mL。