[發(fā)明專利]用于監(jiān)測(cè)環(huán)境污染物的發(fā)光菌的復(fù)壯方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010624702.2
• 申請(qǐng)日: 2020-07-02
• 公開（公告）號(hào): CN111979170B
• 公開（公告）日: 2022-10-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱文霞;馬云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省臨沂生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)中心;朱文霞
• 主分類號(hào): C12N1/38
• 分類號(hào): C12N1/38;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于生物環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，公開了用于監(jiān)測(cè)環(huán)境污染物的發(fā)光菌的復(fù)壯培養(yǎng)液及其復(fù)壯方法，其包括如下組份：氯化鈉，氯化鎂，三磷酸腺苷，蛋氨酸，醋酸鈣，無菌脫纖維綿羊血。本發(fā)明通過對(duì)復(fù)壯培養(yǎng)液進(jìn)行優(yōu)化和改進(jìn)，20?30min之內(nèi)快速激活了靜息細(xì)胞，菌體細(xì)胞存活率和酶活力較現(xiàn)有技術(shù)明顯提高，發(fā)光效率完全恢復(fù)，有助于快速準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)環(huán)境污染物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及用于監(jiān)測(cè)環(huán)境污染物的發(fā)光菌的復(fù)壯方法，尤其涉及用于監(jiān)測(cè)環(huán)境污染物的鰒發(fā)光桿菌的復(fù)壯方法。

背景技術(shù)

環(huán)境監(jiān)測(cè)方法可以劃分為兩類: 理化分析技術(shù)和生物監(jiān)測(cè)。其中理化分析技術(shù)常常用于單一理化指標(biāo)的測(cè)試，但不能反應(yīng)污染物毒性的大小。傳統(tǒng)的生物監(jiān)測(cè)以水蚤、藻類或魚類等為受試對(duì)象，雖然能反映毒物對(duì)生物的直接影響，但是這些方法的最大缺點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)比較繁瑣。近年來，針對(duì)傳統(tǒng)生物毒性檢測(cè)方法的不足，發(fā)光細(xì)菌法作為一種新型生物毒性監(jiān)測(cè)技術(shù)正在廣泛應(yīng)用，引起了廣大環(huán)保科研工作者的關(guān)注。

發(fā)光細(xì)菌用于環(huán)境毒性檢測(cè)過程中，菌種是重要的影響因素。發(fā)光細(xì)菌是一類在正常的生理?xiàng)l件下能夠發(fā)射可見熒光的細(xì)菌,這種可見熒光波長(zhǎng)在450-490nm之間，在黑暗處肉眼可見。發(fā)光細(xì)菌是一種分布很廣泛的發(fā)光生物，目前已知的發(fā)光細(xì)菌分為四屬，分別是弧菌屬、發(fā)光桿菌屬、希瓦氏菌屬和光桿菌屬。按照生存環(huán)境來分類，發(fā)光細(xì)菌可以分為海洋發(fā)光細(xì)菌、淡水發(fā)光細(xì)菌和陸地發(fā)光細(xì)菌。海洋發(fā)光細(xì)菌根據(jù)其DNA相似程度可分為五簇，哈維氏弧菌、費(fèi)氏弧菌、發(fā)光桿菌、羽田西瓦氏菌和創(chuàng)傷弧菌。已知的淡水發(fā)光細(xì)菌有感染甲殼類生物的霍亂弧菌和青海弧菌。陸地上的發(fā)光細(xì)菌寄生在昆蟲或者動(dòng)物體內(nèi)，主要是光桿菌屬，包括發(fā)光光桿菌、溫和光桿菌、非共生光桿菌。

發(fā)光菌在使用過程中，一般是以凍干粉的形式存在，使用時(shí)進(jìn)行復(fù)蘇或擴(kuò)大培養(yǎng)，而該過程決定著菌株的數(shù)量和活力，復(fù)蘇工藝不當(dāng)會(huì)造成菌株大量死亡從而造成亮度不夠難以進(jìn)行毒性測(cè)試，而且復(fù)蘇培養(yǎng)液中的組分可能會(huì)對(duì)菌株發(fā)光會(huì)造成一定的影響。然而，不同的發(fā)光菌由于分類學(xué)和理化性質(zhì)的不同，復(fù)蘇以及培養(yǎng)工藝也存在較大的差異。

現(xiàn)有技術(shù)對(duì)發(fā)光菌的復(fù)蘇和培養(yǎng)有一些記載。

文獻(xiàn)1：CN102465097A，通過開發(fā)專門的細(xì)菌凍存培養(yǎng)基和復(fù)蘇溶液，實(shí)現(xiàn)發(fā)光細(xì)菌菌種的長(zhǎng)期保存和快速復(fù)蘇，既節(jié)省了測(cè)試成本，也大大縮短了毒性測(cè)試的時(shí)間，為化學(xué)污染物的快速毒性試測(cè)試提供了可能。凍存培養(yǎng)基的組成，包括無機(jī)組分(如氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鎂、氯化鉀等)，有機(jī)組分(包括胰蛋白胨、酵母浸膏、氨基酸、甘油、維生素、葡萄糖等)。復(fù)蘇溶液的組成，包括無機(jī)組分(如氯化鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鉀等)和有機(jī)組分(包括胰蛋白胨、酵母浸膏、氨基酸、甘油、維生素、葡萄糖等)。但是上述凍干培養(yǎng)基和復(fù)蘇溶液并沒有具體組分的配比關(guān)系。

文獻(xiàn)2：CN102604873A公開了一種海洋發(fā)光細(xì)菌的復(fù)壯方法，復(fù)壯培養(yǎng)基含有酪蛋白水解酶2-8g/L，甘油磷酸鈉20-25g/L，酵母膏2.5g/L。

文獻(xiàn)3：CN109593692A公開了一種發(fā)光細(xì)菌的培養(yǎng)基，包括以下重量份原料；0.4-0.6份酵母浸出汁、0.4-0.6份胰蛋白陳、2-4份NaCl、0.4-0.6份Na2HPO4、0.05-0.15份KH2PO4、 0.2-0.4份甘油和98-102份蒸餾水。

文獻(xiàn)4：CN110724639A公開了一種用于費(fèi)氏弧菌凍干制劑，包含菌泥和凍干保護(hù)劑，凍干保護(hù)劑由以下原料組成：脫脂乳的含量為15wt%，蔗糖的含量為6wt%，殼聚糖的含量為0.6wt%，谷氨酸鈉的含量為1wt%，四氫嘧啶的含量為0.4wt%，余量為蒸餾水。