[發(fā)明專利]包被豬偽狂犬病病毒中和表位蛋白片段的ELISA抗體檢測試劑盒、含有其的疫苗組合物

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010623161.1
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN113866420A
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田克恭;譚菲菲;王瑩
• 申請（專利權(quán)）人: 洛陽普泰生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/531;A61K39/245;A61P31/22
• 代理公司: 北京華夏正合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

本發(fā)明提供一種豬偽狂犬病病毒中和抗體的ELISA抗體檢測試劑盒，該試劑盒包括包被有豬偽狂犬病病毒gD蛋白中和表位的蛋白片段的支持介質(zhì)，酶標(biāo)二抗試劑，對該酶標(biāo)二抗反應(yīng)的檢測試劑，陰性對照和陽性對照；該豬偽狂犬病病毒gD蛋白中和表位的蛋白片段如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、或SEQ ID NO.5所示。本發(fā)明的ELISA抗體檢測試劑盒能對不同種的豬偽狂犬病毒株制備的疫苗均能用于評價(jià)其所產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)，以用于評價(jià)不同種疫苗免疫后的效果，還有助于根據(jù)檢測結(jié)果及時(shí)制定科學(xué)的免疫程序。本發(fā)明還提供了含免疫量的該豬偽狂犬病病毒gD蛋白中和表位的蛋白片段的疫苗組合物，其對PRV不同類型(包括原有疫苗株、經(jīng)典株、變異株)的毒株均產(chǎn)生中和作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及包被有豬偽狂犬病病毒中和表位的蛋白片段的ELISA抗體檢測試劑盒、含有其的疫苗組合物、和應(yīng)用。

背景技術(shù)

偽狂犬病，又稱Aujeszky氏病，是由皰疹病毒科(Herpesviridae)α亞科中的豬皰疹病毒I型(Suid herpesvirus 1strain，亦稱偽狂犬病病毒Pseudorabies virus，PRV)所引起的豬、牛、羊、犬、貓、兔、鼠、野豬、貂、熊和狐等多種家畜、野生動物的一種以發(fā)熱、奇癢(除豬外)及腦脊髓炎為主癥的急性傳染病。豬的偽狂犬病在我國廣泛存在，危害嚴(yán)重，是制約規(guī)模化豬場生產(chǎn)的主要疾病之一，可引起妊娠母豬流產(chǎn)、死胎或木乃伊胎，仔豬出現(xiàn)神經(jīng)癥狀、麻痹、特別地20周齡內(nèi)感染后100％死亡率，以及大中豬呼吸道癥狀等。

目前市售的疫苗廠家有40多個，為了更準(zhǔn)確比較免疫效果，郭天成等(豬偽狂犬病毒Bartha株與變異株疫苗免疫后中和效價(jià)比較試驗(yàn),廣東畜牧獸醫(yī)科技,2017,42(4):46-47)采用中和試驗(yàn)對疫苗免疫后的豬只進(jìn)行中和抗體效價(jià)的量化檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PRV變異株疫苗免疫即使免疫次數(shù)少于原有Bartha株疫苗但免疫后的中和效價(jià)依然明顯高于原有Bartha株疫苗。普萊柯公司也歷時(shí)7年光景潛心研究，率先研發(fā)出國內(nèi)首個獲批的針對豬偽狂犬病變異毒株的滅活疫苗(商品名：普偽凈)，該疫苗免疫后產(chǎn)生的中和抗體滴度是進(jìn)口疫苗的16-18倍、是國產(chǎn)活疫苗的5-6倍、是國產(chǎn)滅活疫苗的5-6倍，遠(yuǎn)高于其他現(xiàn)有產(chǎn)品(https://dy.163.com/v2/article/detail/EFHKHKL10519EHE9.html)。目前，變異毒株制備的疫苗免疫后的評價(jià)方式主要是中和試驗(yàn)，但中和試驗(yàn)耗時(shí)約5天且必須在具有細(xì)胞操作能力的實(shí)驗(yàn)室完成，不利于臨床應(yīng)用。另外，免疫機(jī)理尚不清楚，后期疫苗改進(jìn)也需要可臨床應(yīng)用的評價(jià)方法。

因此，亟需研制一種快速簡便的檢測方法，其對不同種的豬偽狂犬病毒制備的疫苗產(chǎn)生的中和抗體均進(jìn)行檢測，并據(jù)此結(jié)果指定免疫程序。

此外，臨床上也亟需一種能對不同種類的豬偽狂犬病毒均具有中和作用的疫苗，以解決現(xiàn)實(shí)的臨床問題。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種包被有豬偽狂犬病病毒中和表位的蛋白片段的ELISA抗體檢測試劑盒，其中，所述ELISA抗體檢測試劑盒包括包被有豬偽狂犬病病毒gD蛋白中和表位的蛋白片段的支持介質(zhì)，酶標(biāo)二抗試劑，對所述酶標(biāo)二抗反應(yīng)的檢測試劑，陰性對照和陽性對照；所述豬偽狂犬病病毒gD蛋白中和表位的蛋白片段如SEQ IDNO.3、SEQ ID NO.4、或SEQ ID NO.5所示。

本發(fā)明的試劑盒檢測結(jié)果與中和試驗(yàn)結(jié)果一致，可替代試驗(yàn)要求復(fù)雜、需要環(huán)境苛刻、耗時(shí)長(需5天時(shí)間)的中和試驗(yàn)，不僅針對先前的疫苗株、豬偽狂犬病毒經(jīng)典株制備的疫苗、還是豬偽狂犬病毒變異株制備的疫苗均能用于評價(jià)其所產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)，以用于評價(jià)不同種疫苗免疫后的效果，還有助于根據(jù)檢測結(jié)果及時(shí)制定科學(xué)的免疫程序。