[發明專利]中性蛋白酶基因、中性蛋白酶及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010619037.8
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111944790B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 王建榮;祝木金;余思;王平;孟建軍;劉小慧;曹革
• 申請（專利權）人: 深圳潤康生態環境股份有限公司
• 主分類號: C12N9/50
• 分類號: C12N9/50;C12N15/57;C12N15/75;C12N1/21;C12R1/125
• 代理公司: 深圳中一聯合知識產權代理有限公司 44414
• 代理人: 郝文婷

1.一種中性蛋白酶基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一種中性蛋白酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.一種重組表達載體，其特征在于，包括權利要求1所述的中性蛋白酶基因。

4.一種重組表達菌株，其特征在于，包括權利要求3所述的重組表達載體。

5.一種中性蛋白酶的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

提供中性蛋白酶的核苷酸序列、表達載體和表達菌株；

將所述中性蛋白酶的核苷酸序列與所述表達載體進行連接后，通過擴增引物進行擴增，得到含有中性蛋白酶基因的重組表達載體；

將所述重組表達載體轉入表達菌株，得到重組表達菌株；

對所述重組表達菌株進行培養，得到所述中性蛋白酶；

其中，所述中性蛋白酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述擴增引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3-6所示。

6.根據權利要求5所述中性蛋白酶的制備方法，其特征在于，所述表達載體為pBEs表達載體。

7.根據權利要求5所述中性蛋白酶的制備方法，其特征在于，所述表達菌株為枯草芽孢桿菌。

8.根據權利要求5-7任一項所述中性蛋白酶的制備方法，其特征在于，對所述重組表達菌株進行培養的方法是：先將所述重組表達菌株接入LB培養基中在37℃、200rpm條件下進行培養24h，然后再接入麥芽糖培養基中，在33℃-37℃、160rpm-200rpm條件下培養36h-54h，將所得培養物進行純化，得到所述中性蛋白酶。

9.權利要求2所述中性蛋白酶或權利要求5-8任一項所述中性蛋白酶的制備方法制備得到的中性蛋白酶在水解蛋白質中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，在所述水解蛋白質的反應中，所述中性蛋白酶的反應溫度為60℃-70℃。