[發明專利]堿性蛋白酶基因、堿性蛋白酶及其制備方法和應用

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• 申請號: 202010619034.4
• 申請日: 2020-07-01
• 公開（公告）號: CN111893126A
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 王建榮;祝木金;余思;王平;孟建軍;劉小慧;曹革
• 申請（專利權）人: 深圳潤康生態環境股份有限公司
• 主分類號: C12N15/57
• 分類號: C12N15/57;C12N9/54;C12N15/75;C12N1/21;C12P21/06;C12R1/125
• 代理公司: 深圳中一聯合知識產權代理有限公司 44414
• 代理人: 郝文婷

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種堿性蛋白酶基因、堿性蛋白酶及其制備方法和應用。本發明堿性蛋白酶基因aprbp的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通過對來源于芽孢桿菌Bacillus patagoniensis堿性蛋白酶的序列(GenBank:WP_078392427.1)進行綜合優化得到。本發明堿性蛋白酶AprBp的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不僅豐富了堿性蛋白酶的種類和來源途徑，且其自身具有較高的酶活性，在5L發酵罐中的最高酶活可達18035U/mL，同時，在較寬的溫度范圍和堿性條件下均表現出良好的穩定性，具有良好的應用前景和產業價值。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及堿性蛋白酶基因aprbp及相應的重組表達載體、重組表達菌株，以及堿性蛋白酶AprBp及其制備方法和應用。

背景技術

蛋白酶是催化蛋白質水解的一類酶，蛋白酶作為一種重要的工業酶制劑，被廣泛應用于飼料加工、釀造、洗滌、食品加工等領域。蛋白酶分布廣泛，目前市面上的蛋白酶主要來源于微生物，相對于動物及植物，微生物蛋白酶pH值范圍廣，生產成本低。根據微生物蛋白酶最適反應pH環境可將蛋白酶分為酸性蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶。堿性蛋白酶是一類在堿性條件下水解蛋白質的酶類。

芽孢桿菌Bacillus patagoniensis堿性蛋白酶對許多蛋白原料(魚粉、雞肉粉、大豆蛋白粉等)具有良好的水解能力，表明該堿性蛋白酶在蛋白水解領域具有很好的應用潛力。然而，目前限制其在蛋白水解領域應用的主要因素是其生產成本過高，在搖瓶條件下天然菌Bacillus patagoniensis堿性蛋白酶發酵活力只能達到80U/mL。因此如果能夠降低堿性蛋白酶的生產成本，可為其應用到不同的領域奠定基礎。

發明內容

本發明的目的是提供堿性蛋白酶基因aprbp及相應的重組表達載體、重組表達菌株，以及堿性蛋白酶AprBp及其制備方法和應用，旨在解決現有來源于芽孢桿菌Bacilluspatagoniensis堿性蛋白酶的生產成本過高的技術問題。

為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：

本發明一方面提供了一種堿性蛋白酶基因aprbp，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本發明另一方面提供了一種堿性蛋白酶AprBp，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本發明再一方面提供了一種重組表達載體，其包括所述的堿性蛋白酶基因aprbp。

本發明又一方面提供了一種重組表達菌株，其包括上述的重組表達載體。

本發明還有一方面提供了一種堿性蛋白酶AprBp的制備方法，其包括如下步驟：

提供堿性蛋白酶基因aprbp、表達載體和表達菌株；

對所述堿性蛋白酶基因aprbp進行擴增，所得擴增產物與所述表達載體進行連接，得到重組表達載體；

將所述重組表達載體轉入表達菌株，得到重組表達菌株；

對所述重組表達菌株進行培養，得到所述堿性蛋白酶AprBp；

其中，所述堿性蛋白酶基因aprbp的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本發明最后一方面提供了上述堿性蛋白酶AprBp或上述堿性蛋白酶AprBp的制備方法制備得到的堿性蛋白酶AprBp在水解蛋白質中的應用。