[發明專利]一種銨鹽誘導型啟動子及其在調控目的基因表達中的應用

有效

• 申請號: 202010618552.4
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111718936B
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發明（設計）人: 徐美娟;饒志明;王晴;孫聰;楊套偉;張顯
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/77;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/15;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

本發明公開了一種銨鹽誘導型啟動子及其在調控目的基因表達中的應用，屬于生物技術領域。本發明提供了一種銨鹽誘導型啟動子P?Cgl2258，使用攜帶此銨鹽誘導型啟動子P?Cgl2258的重組質粒在重組菌中表達目的基因時，可通過調控培養基中銨鹽的濃度以調控目的基因的表達量，為重組菌在不同氮源條件下表達外源基因提供了有效的工具。

技術領域

本發明涉及一種銨鹽誘導型啟動子及其在調控目的基因表達中的應用，屬于生物技術領域。

背景技術

棒狀桿菌是革蘭氏陽性菌，因其成員的一端或兩端膨大呈棒狀而得名。由于代調控機制已經得到解析，棒狀桿菌已成為一種較為常用的被用于構建重組菌以生產目的蛋白的宿主細胞。

啟動子是控制基因表達水平和表達時空順序的重要元件，細胞內蛋白的差異表達可能是其編碼基因上游啟動子在受到不同溶氧條件的刺激下而進行的不同調控。誘導型啟動子是指能夠在特定信號的刺激下啟動或改變基因的轉錄水平的一類啟動子。目前，用于構建重組棒狀桿菌的表達載體(如pWLQ2、pVWEx1、pCRC200、pECt和pBB1等)所攜帶的啟動子主要是來源于大腸桿菌的IPTG誘導型啟動子P-lac、P-tac、P-trc等。

例如，李佑新等人通過攜帶啟動子tac的pDXW-9載體將編碼谷氨酸脫羧酶的基因導入谷氨酸棒桿菌中獲得了一株可高產γ-氨基丁酸的重組谷氨酸棒桿菌(具體可見參考文獻：李佑新.短乳桿菌谷氨酸脫羧酶在谷氨酸棒桿菌中的表達和γ-氨基丁酸的生物合成[D].江南大學,2012.)；C S,Millard等人通過攜帶啟動子tac的pJF118EH載體將編碼磷酸烯醇丙酮酸羧化酶的基因導入大腸桿菌中獲得了一株可高產琥珀酸的重組大腸桿菌(具體可見參考文獻C S,Millard,Y P,et al.Enhanced production of succinic acid byoverexpression of phosphoenolpyruvate carboxylase in Escherichia coli.[J].Applied and environmental microbiology,1996.)。

但是，由于IPTG具有毒性而且價格昂貴，這些攜帶來源于大腸桿菌的IPTG誘導型啟動子的重組棒狀桿菌大部分情況下僅適用于實驗室，并不適用于大規模工業化生產。因此，針對棒狀桿菌對高濃度碳源和氮源等營養的需求，找到一種適用于棒狀桿菌的滲透壓誘導型啟動子替代現有的IPTG誘導型啟動子對實現使用重組棒狀桿菌生產目的蛋白的大規模工業化生產十分重要。

發明內容

[技術問題]

本發明要解決的技術問題是提供一種銨鹽誘導型啟動子。

[技術方案]

為解決上述技術問題，本發明提供了一種啟動子，所述啟動子的核苷酸序列如SEQID No.1所示。

本發明還提供了一種重組質粒，所述重組質粒攜帶上述啟動子以及目的基因。

在本發明的一種實施方式中，所述目的基因位于上述啟動子的下游。

在本發明的一種實施方式中，所述目的基因為編碼綠色熒光蛋白的基因。

在本發明的一種實施方式中，所述重組質粒的表達載體為pDXW-8質粒、pDXW-10質粒或pXMJ19質粒。所述pDXW-8質粒記載于公開號為CN101693901A的專利申請文本中。

本發明還提供了一種宿主細胞，所述宿主細胞攜帶上述啟動子以及目的基因；或者，所述宿主細胞攜帶上述重組質粒。

在本發明的一種實施方式中，所述目的基因位于上述啟動子的下游。

在本發明的一種實施方式中，所述目的基因為編碼綠色熒光蛋白的基因。

在本發明的一種實施方式中，所述宿主細胞為棒狀桿菌或大腸桿菌。