[發明專利]一種大規模快速生產高純度高活性慢病毒載體的方法

在審

• 申請號: 202010616404.9
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111876393A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: 石先燈;李進;吳健華
• 申請（專利權）人: 恒瑞源正（上海）生物科技有限公司;恒瑞源正（廣州）生物科技有限公司;恒瑞源正（深圳）生物科技有限公司;恒瑞源正（北京）生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N7/02
• 分類號: C12N7/02;C12N15/867
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 陸惠中;田歡

1.一種生產病毒載體的方法，其特征在于，包括：

S1：使用濾器對含有慢病毒載體的細胞培養液進行過濾澄清；

S2：將S1得到的澄清液進行超濾濃縮和換液，得到濃縮后的慢病毒載體；

S3：將S2得到的慢病毒濃縮液添加核酸酶進行消化；

S4：將S3消化過的樣品上樣Capto Core700層析柱，收集第一個吸收峰；

S5：將S4收集到的樣品進行超濾濃縮和換液，即得到慢病毒載體。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S1中，使用0.65或0.45μm玻璃纖維濾器進行過濾澄清。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S2中，超濾膜截留分子量是100-500KD。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S3中，將得到的慢病毒濃縮液使用包含全能核酸酶的消化反應液進行消化；優選的，消化反應液包括：10-100mM Tris-Cl，1-10mMMgCl₂和5-200U/ml全能核酸酶；優選的，消化反應條件為：在2-8℃下反應12-24小時。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S4中，將消化后的樣品上樣到預先平衡過的Capto Core700層析柱；平衡層析柱緩沖液中Tris-Cl濃度為10-100mM，NaCl濃度為10-300mM，pH值為7-9。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，使用的平衡層析柱緩沖液中Tris-Cl濃度為10-100mM，NaCl濃度為10-300mM，pH值為7-9；優選的，洗脫液中Tris-Cl濃度為10-100mM，NaCl濃度為0.3-1.0M，pH值為7-9。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，在S5中，超濾膜截留分子量是50-300KD。

8.根據權利要求1-7任一項所述的方法得到的慢病毒載體。

9.一種產品，其特征在于，所述產品包括權利要求8所述的慢病毒載體。

10.根據權利要求8所述的慢病毒載體或權利要求9所述的產品在基因治療領域中的應用。