[發明專利]一種大蔥花培育種用誘導培養基及誘導培養方法

在審

• 申請號: 202010614533.4
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111657146A
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 富阿麗
• 申請（專利權）人: 富阿麗
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種大蔥花培育種用誘導培養基，其特征在于，所述培養基的配方如下（以1L計）：

KNO₃ 1500-1700mg，CaCl₂·2H₂O 310-340mg，（NH₄）₂ SO₄ 127-153mg，NaH₂PO₄·H₂O100-130mg，MgSO₄·7H₂O 160-190mg，MnSO₄·4H₂O 4.0-7.0mg，ZnSO₄·7H₂O 1.5-2.5mg，H₃BO₃ 5.0-7.0mg，KI 1.0-2.0mg，Na₂MoO₄·2H₂O 0.2-0.3mg，CuSO₄·5H₂O 0.02-0.03mg，CoCl₂·6H₂O 0.02-0.03mg，Fe-EDDHA 26.4-30.2mg，玉米須提取液30-50ml，水解酪蛋白120-150mg，肌醇90-120mg，丙酮酸鈉15.5-21.3mg，延胡索酸20-25mg，天冬氨酸2.0-4.0mg，甘氨酸1.0-3.0mg，腐殖酸鈉8-12mg，核黃素0.2-0.4mg，維生素B1 0.3-0.5mg，維生素B60.5-0.7mg，D-生物素0.8-1.0mg，膽堿2.6-3.0mg，水楊酸0.08-0.12mg，丁酸鈉8-12mmol，多效唑0.4-0.6mg，KT 0.4-0.6mg，6-BA 0.9-1.1mg，對羥基苯甲酸0.8-1.2g，蔗糖25-35g，麥芽糖25-35g，植物凝膠6-8g。

2.根據權利要求1所述的一種大蔥花培育種用誘導培養基，其特征在于，所述培養基的pH值為5.8。

3.根據權利要求1所述的一種大蔥花培育種用誘導培養基，其特征在于，所述玉米須提取液由以下方法制備：將玉米須在NaOH溶液中浸泡15min，洗滌至中性，然后按照1:10的比例加清水，加熱至沸騰，保溫30min，靜置24h后用功率為300W、頻率為40kHz的超聲波處理10min，雙層紗布過濾后取濾液。

4.一種大蔥花藥誘導培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）取材與預處理：于晴朗天氣的上午采集大蔥花蕾，用冰盒帶至實驗室，鏡檢選出花粉發育時期為單核靠邊期的花蕾，用水濕潤后放入墊有試紙的培養皿內，置于4℃低溫預處理2~3d；

2）滅菌：將花蕾洗凈后放入三角瓶中，加入0.1%升汞，加入吐溫2滴，放至搖床上震蕩10~12min，三角瓶用體積分數75%的乙醇擦拭消毒后放入超凈工作臺中，倒出消毒液，再用無菌水沖洗3~4次，直到瓶內沒有泡沫為止；

3）接種與培養：用鑷子從滅菌后的花蕾中剝出花藥，切除花絲后接種到誘導培養基上，先置于均勻磁場中處理30min，再放入25℃恒溫培養箱中暗培養直至愈傷組織形成。

5.根據權利要求4所述的一種大蔥花藥誘導培養方法，其特征在于，所述步驟1）中采集的大蔥花蕾為未開放或剛開放。

6.根據權利要求4所述的一種大蔥花藥誘導培養方法，其特征在于，所述步驟1）中鏡檢的方法為：從花蕾中剝出花藥，置于載玻片上，加一小滴卡寶品紅染色液，用鑷子搗碎花藥，擠出其中的小孢子后，去除殘渣，然后蓋上載玻片置于顯微鏡下觀察小孢子發育時期。

7.根據權利要求4所述的一種大蔥花藥誘導培養方法，其特征在于，所述步驟3）中磁場強度為400mT。