[發明專利]一種江西鉛山紅芽芋試管球莖胚性愈傷組織誘導的方法

有效

• 申請號: 202010614516.0
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111567404B
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發明（設計）人: 尹明華;楊玉琪;洪森榮
• 申請（專利權）人: 上饒師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理有限公司 11562
• 代理人: 謝秀娟

1.一種江西鉛山紅芽芋試管球莖胚性愈傷組織誘導的方法，其特征在于,包括以下步驟：

(1)一次預處理：選取江西鉛山紅芽芋誘導的試管球莖作為外植體，無菌條件下置于含殼寡糖和石墨烯量子點的MS培養液中浸泡；

(2)二次預處理：無菌條件下，將步驟(1)中預處理后的江西鉛山紅芽芋誘導的試管球莖，置于含殼寡糖和碳納米管的MS培養液浸泡；

(3)包埋：將經過2次預處理的江西鉛山紅芽芋試管球莖切片，無菌條件下與含海藻酸鈉和蔗糖的無鈣離子改良MS培養液混合均勻，將混合液滴入含有殼寡糖、石墨烯量子點、碳納米管、CaCl₂和蔗糖的MS培養液中進行包埋，形成江西鉛山紅芽芋試管球莖切片包埋珠；

(4)無菌條件下，將江西鉛山紅芽芋試管球莖切片包埋珠接種在MS+KT 1mg/L+NAA0.2mg/L+0.3-0.5g/L石墨烯量子點+0.05g/L殼寡糖固體培養基上黑暗培養；

(5)無菌條件下，將培養后的江西鉛山紅芽芋試管球莖切片包埋珠接種在MS+KT 1mg/L+NAA 0.2mg/L+0.3-0.5g/L碳納米管+0.05g/L殼寡糖固體培養基上再次進行黑暗培養；

(6)培養完成后，無菌條件下，將江西鉛山紅芽芋試管球莖切片從包埋珠中剝離出來，接種在MS+KT 2mg/L+NAA 0.5mg/L+2,4-D 0.3mg/L+0.3-0.5g/L石墨烯量子點+0.3-0.5g/L碳納米管+0.05g/L殼寡糖固體培養基上進行黑暗培養，即可誘導出江西鉛山紅芽芋試管球莖切片的胚性愈傷組織；

所述步驟(1)中，MS培養液中的殼寡糖濃度為0.05g/L，石墨烯量子點的濃度為0.3-0.5g/L，所述浸泡時間為48h；

所述步驟(2)中，MS培養液中殼寡糖的濃度為0.05g/L，碳納米管的濃度為0.3-0.5g/L，所述浸泡時間為48h；

所述步驟(3)中，無鈣離子改良MS培養液中海藻酸鈉所占質量體積比為3％，蔗糖濃度為0.2mol/L；

步驟(3)中所述MS培養液中殼寡糖濃度為0.05g/L、石墨烯量子點濃度為0.03-0.05g/L、碳納米管濃度為0.03-0.05g/L、CaCl₂濃度為0.1mol/L、蔗糖濃度為0.2mol/L；

所述步驟(3)中包埋時間為40-50min。

2.根據權利要求1所述的一種江西鉛山紅芽芋試管球莖胚性愈傷組織誘導的方法，其特征在于， 步驟(3)中所述江西鉛山紅芽芋試管球莖切片包埋珠的粒徑大小為1.9-2.1cm。

3.根據權利要求1所述的一種江西鉛山紅芽芋試管球莖胚性愈傷組織誘導的方法，其特征在于， 所述步驟(4)和步驟(5)中，黑暗培養的培養溫度為25±2℃，培養時間為15d。

4.根據權利要求1所述的一種江西鉛山紅芽芋試管球莖胚性愈傷組織誘導的方法，其特征在于， 所述步驟(6)中，黑暗培養的培養溫度為25±2℃，培養時間為50-60d。