[發明專利]一種靶向調控Serpin3基因的miR-199-x及其應用

有效

• 申請號: 202010614475.5
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111778247B
• 公開（公告）日: 2022-03-04
• 發明（設計）人: 許小霞;金豐良;張雨欣
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/20;A01N63/30;A01P7/04
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 趙崇楊

本發明公開了一種靶向調控Serpin3基因的miR?199?x及其應用，所述miR?199?x序列如SEQ ID NO:1所示，Serpin3基因序列如SEQ ID NO:2所示。所述miR?199?x靶向絲氨酸蛋白酶抑制劑Serpin3基因，miR?199?x負調控Serpin3的表達，Serpin3進一步負調控PO活力。說明miR?199?x靶向Serpin3對小菜蛾天然免疫進一步進行精準調控，可利用miR?199?x作為分子靶標來調控Serpin3的表達來進行生物防治小菜蛾等十字花科蔬菜害蟲。

技術領域

本發明涉及農業生物技術領域，更具體地，涉及一種靶向調控Serpin3基因的miR-199-x及其應用。

背景技術

MicroRNA，簡稱miRNA，是一類長度為18～24nt的基因組編碼的非編碼RNA，在真核生物轉錄后基因表達的過程中發揮著至關重要的作用。要獲得成熟的miRNA，需要經歷primary miRNA(pri-miRNA)、pre-miRNA。RNA聚合酶最先合成的是miRNA的初始轉錄本，也就是pri-miRNA。Pri-miRNA一般長達數千nt，內部有莖環結構。在細胞核內，Pri-miRNA的莖環結構被RNase III型的核酸內切酶Drosha從初始轉錄本上切割下來，得到的大約65nt長的小發卡結構，稱為pre-miRNA。隨后，pre-miRNA被細胞核中的轉運蛋白exportin 5(EXP5)轉運到細胞質中。在細胞質中，pre-miRNA會被核酸內切酶Dicer切割，形成一個22nt左右的雙鏈RNA。Drosha和Dicer切割miRNA前體時，需要許多輔助蛋白的幫助，例如DGCR8(針對Drosha而言)、TRBP和PACT(針對Dicer而言)，這個機制確保了整個過程可以受到精準的調控。隨后，這個雙鏈RNA會被裝載到Ago蛋白中，以便形成最終發揮作用的RISC復合物(RNA-induced silencing complex，RNA介導的沉默復合體)。

miRNA主要有三種作用方式，轉錄抑制、mRNA的切割或降解。動物中一般不涉及mRNA的切割。miRNA通過堿基互補配對與靶標mRNA的3’端非翻譯區結合而降解靶基因mRNA或者抑制其翻譯成蛋白。miRNA不光可以與3’UTR結合，研究表明，它也可以與5’UTR或者CDS區結合行使功能。一般來說，結合到CDS區的miRNA主要是負調控，而結合到5’UTR的miRNA則常常起到轉錄激活的作用。

由于miRNA在轉錄后水平調控基因的表達，所以它在維持免疫穩態和免疫可塑性方面發揮著關鍵的作用。miRNA可以調控抗菌肽的表達。Choi和Hyun的研究表明miR-8在黑腹果蠅中負調控抗菌肽Drosomycin和Diptericin的表達，以便在正常非感染條件下維持其正常水平，從而實現免疫平衡。在敲除miR-8的幼蟲和果蠅中，抗微生物肽的轉錄水平顯著增加。據預測，miR-8可能靶向革蘭氏陰性結合蛋白3(GNBP3)的轉錄本，該轉錄本在真菌感染后誘導Toll途徑，并靶向JNK途徑的調節劑Pvf。但是，目前還未見有可調控小菜蛾PO活力的miRNAs的相關報道。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中存在的上述缺陷和不足，提供一種靶向調控Serpin3基因的miR-199-x。

本發明的第二個目的在于提供一種提高miR-199-x表達的miRNA模擬物。

本發明的第三個目的在于抑制所述miR-199-x表達的miRNA抑制劑。

本發明的第四個目的在于提供所述miR-199-x和miR-199-x抑制劑的應用。

本發明的上述目的是通過以下技術方案給予實現的：

一種靶向調控Serpin3基因的miR-199-x，所述miR-199-x序列如SEQ ID NO:1所示，Serpin3基因序列如SEQ ID NO:2所示。