[發明專利]一種禽流感H9亞型疫苗生產中的滅活病毒的方法

在審

• 申請號: 202010614103.2
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111718909A
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發明（設計）人: 張文炎;劉之文;詹烜子;劉錦容;高艷;張云麗;王土活
• 申請（專利權）人: 肇慶大華農生物藥品有限公司
• 主分類號: C12N7/06
• 分類號: C12N7/06;A61K39/145;A61P31/16
• 代理公司: 廣州市時代知識產權代理事務所(普通合伙) 44438
• 代理人: 楊樹民

1.一種禽流感H9亞型疫苗生產中的滅活病毒的方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）病毒的接種和培養：選擇制備疫苗用LMH細胞進行傳代培養，待LMH細胞密度達1.0×10⁶-1.5×10⁶個/mL時分別接種禽流感病毒H9亞型，并加入細胞維持液進行繁殖培養；

（2）病毒收集、濃縮和純化：將步驟（1）中細胞培養液進行凍融3次，于4℃、6000-8000rpm條件離心10-20min后，收集禽流感病毒H9亞型上清液，將上述上清液超濾濃縮，得禽流感病毒H9亞型病毒毒液；

（3）病毒滅活：在負壓生產區，根據病毒液的量加入終濃度為0.025%-0.1％的BPL（β-丙內酯），至于2-8℃恒溫搖床中，滅活16-48h后，終止反應，獲得含有滅活H9亞型禽流感病毒的溶液；

（4）疫苗制備：將白油、吐溫、硬脂酸鋁混合制備油相，將步驟（3）中滅活后的禽流感病毒的溶液與油相按照體積比1:2混合乳化，制備得到禽流感H9亞型疫苗。

2.根據權利要求1所述的一種禽流感H9亞型疫苗生產中的滅活病毒的方法，其特征在于：步驟（2）中離心速率為離心速率7000rpm，離心時間15min。

3.根據權利要求1所述的一種禽流感H9亞型疫苗生產中的滅活病毒的方法，其特征在于：步驟（3）中滅活溫度2-4℃，滅活時間24-48h。

4.根據權利要求3所述的一種禽流感H9亞型疫苗生產中的滅活病毒的方法，其特征在于：步驟（3）中滅活溫度4℃，滅活時間24h。

5.根據權利要求1所述的一種禽流感H9亞型疫苗生產中的滅活病毒的方法，其特征在于：步驟（3）中，病毒液的量加入終濃度為0.05％的BPL，至于4℃恒溫搖床中，滅活24h。

6.根據權利要求1所述的一種禽流感H9亞型疫苗生產中的滅活病毒的方法，其特征在于：終止反應的方法包括：在37℃條件下水解2小時使丙內酯發生水解進而終止反應。

7.權利要求1-6任一項所述的一種禽流感H9亞型疫苗生產中的滅活病毒的方法制備獲得的疫苗制劑。