[發明專利]一種懷玉山高山馬鈴薯包埋玻璃化法超低溫脫毒的方法

有效

• 申請號: 202010613704.1
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111713406B
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發明（設計）人: 洪森榮;朱麗倩;尹明華
• 申請（專利權）人: 上饒師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理有限公司 11562
• 代理人: 謝秀娟

1.一種懷玉山高山馬鈴薯包埋玻璃化法超低溫脫毒的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)無菌條件下，將懷玉山高山馬鈴薯莖尖與含海藻酸鈉和蔗糖的無鈣離子改良MS培養液混合均勻，得混合液；

(2)包埋：無菌條件下，將步驟(1)的混合液滴入含有殼寡糖、石墨烯量子點、碳納米管、CaCl₂和蔗糖的MS培養液中進行包埋，得到懷玉山高山馬鈴薯莖尖包埋珠；

(3)一次預培養：無菌條件下，將懷玉山高山馬鈴薯莖尖包埋珠用含殼寡糖和石墨烯量子點的MS培養液進行一次預培養；

(4)二次預培養：無菌條件下，將經過一次預培養處理的懷玉山高山馬鈴薯莖尖包埋珠用含殼寡糖和碳納米管的MS培養液進行二次預培養；

(5)一次裝載：無菌條件下，將經過兩次預培養的懷玉山高山馬鈴薯莖尖包埋珠用含殼寡糖和石墨烯量子點的MS培養液進行裝載；

(6)二次裝載：無菌條件下，將步驟(5)得到的懷玉山高山馬鈴薯莖尖包埋珠用含殼寡糖和碳納米管的MS培養液進行二次裝載；

(7)脫水處理：無菌條件下，將步驟(6)得到的懷玉山高山馬鈴薯莖尖包埋珠用含25%甘油＋20%乙二醇＋15%殼寡糖+0.4M石墨烯量子點+0.4M碳納米管的MS培養液進行脫水處理；

(8)無菌條件下，將步驟(7)經過脫水處理的懷玉山高山馬鈴薯莖尖包埋珠置于液氮中保存，然后進行化凍，將莖尖從化凍后的懷玉山高山馬鈴薯莖尖包埋珠中取出，在含1.2M蔗糖的MS+0.05g/L殼寡糖+0.03-0.05g/L石墨烯量子點+0.03-0.05g/L碳納米管的MS液體培養基中洗滌，洗滌后的莖尖先進行暗培養，然后在光照培養條件下培養，即得懷玉山高山馬鈴薯的脫毒植株；

所述步驟(1)中海藻酸鈉與無鈣離子改良MS培養液的質量體積比為3%，蔗糖濃度為0.2mol/L；

所述步驟(2)中殼寡糖濃度為0.05g/L，石墨烯量子點濃度為0.03-0.05g/L、碳納米管濃度為0.03-0.05g/L、CaCl₂濃度為0.1mol/L、蔗糖濃度為0.2mol/L；

所述步驟(3)中殼寡糖濃度為0.05g/L，石墨烯量子點濃度為0.3-0.5g/L；

所述步驟(4)中殼寡糖濃度為0.05g/L，碳納米管濃度為0.3-0.5g/L；

所述步驟(5)中，殼寡糖濃度為2M，石墨烯量子點濃度為0.4M；

所述步驟(6)中，殼寡糖濃度為2M，碳納米管濃度為0.4M。

2.根據權利要求1所述的一種懷玉山高山馬鈴薯包埋玻璃化法超低溫脫毒的方法，其特征在于，所述馬鈴薯莖尖長度為0.5-1cm。

3.根據權利要求1所述的一種懷玉山高山馬鈴薯包埋玻璃化法超低溫脫毒的方法，其特征在于，所述步驟(2)中包埋時間為38-42min， 所述懷玉山高山馬鈴薯莖尖包埋珠的粒徑為1.8-2cm。

4.根據權利要求1所述的一種懷玉山高山馬鈴薯包埋玻璃化法超低溫脫毒的方法，其特征在于，所述步驟(3)中預培養時間為24h。

5.根據權利要求1所述的一種懷玉山高山馬鈴薯包埋玻璃化法超低溫脫毒的方法，其特征在于，步驟(4)中預培養時間為24h。

6.根據權利要求1所述的一種懷玉山高山馬鈴薯包埋玻璃化法超低溫脫毒的方法，其特征在于，步驟(5)中裝載時間為1h；步驟(6)中裝載時間為1h；步驟(7)中脫水時間為1h。

7.根據權利要求1所述的一種懷玉山高山馬鈴薯包埋玻璃化法超低溫脫毒的方法，其特征在于，步驟(8)中化凍溫度為37±1℃，暗培養的溫度為25±2℃。

8.根據權利要求1所述的一種懷玉山高山馬鈴薯包埋玻璃化法超低溫脫毒的方法，其特征在于，步驟(8)中所述光照培養條件為光照時間14h/d，光強1500-2000lx，培養溫度25±2℃。

9.根據權利要求1所述的一種懷玉山高山馬鈴薯包埋玻璃化法超低溫脫毒的方法，其特征在于，所述石墨烯量子點的厚度為1-2nm，粒徑為6-7nm。