[發明專利]一種糖基化光子晶體水凝膠及其在流感病毒檢測中的應用

有效

• 申請號: 202010612731.7
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111690090B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 李艷霞;繆玲;陳毅挺;黃露;婁本勇;康心汕
• 申請（專利權）人: 閩江學院
• 主分類號: C08F220/56
• 分類號: C08F220/56;C08F220/58;C08F222/38;C08J3/075;C08J3/00;C12Q1/70;C12Q1/06;C12Q1/54;C08L25/06;C08L33/26;C12R1/93
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 修斯文;蔡學俊

1.一種糖基化光子晶體水凝膠的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

1）乳糖酸末端氨基化處理：按一定質量比將乳糖酸和乙二胺分別溶于二甲亞砜中，充分溶解后將兩者混勻，并將所得混合液于75 ℃冷凝回流2 h，待產物冷卻至室溫后，倒入氯仿中沉析，過濾，再低溫真空干燥2 h，得到半乳糖端氨基中間體L-NH₂，冷藏，備用；

2）半乳糖功能化單體GAC的合成：按一定質量比將L-NH₂和丙烯酸分別溶于二甲亞砜中，充分溶解后將兩者混勻，接著加入1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞銨鹽和N-羥基硫代琥珀酰亞胺的混合液，室溫下磁力攪拌20 h，然后倒入氯仿中沉析，沉析后所得產物用少量氯仿多次沖洗后低溫真空干燥，得到半乳糖功能化單體GAC；

3）二維光子晶體的組裝：按體積比1-3:1量取聚苯乙烯乳液和正丙醇，將二者超聲混合，然后采用針尖注射法將該混合液垂直勻速地注射在去離子水表面，使其在水表面形成一層光亮的單層聚苯乙烯光子晶體，再將水面上制得的聚苯乙烯光子晶體轉移到載玻片上，將載玻片垂直放置，室溫風干，使得聚苯乙烯二維光子晶體呈規則排列；

4）糖基化光子晶體水凝膠的制備：稱取12g丙烯酰胺和0.4 g甲叉雙丙烯酰胺，加去離子水溶解并定容至50 mL，得A液，儲存在冰箱中備用；取A液1 mL，加GAC攪拌1h，再依次加入1 mL去離子水、20 μL10wt%的過硫酸銨溶液和2 μL 四甲基乙二胺，邊加邊攪拌至混合液聚合呈半膠態時，將其涂到步驟3）所得載有光子晶體的載玻片上，蓋上蓋玻片使其均勻平鋪，靜置，待水凝膠完全成膠后取下蓋玻片，水洗，得到所述糖基化光子晶體水凝膠；

所述半乳糖功能化單體GAC的結構為：。

2.根據權利要求1所述的糖基化光子晶體水凝膠的制備方法，其特征在于：步驟1）中所用乳糖酸和乙二胺的質量比為2-6:1，混合液的質量濃度為0.5-2 g/mL。

3.根據權利要求1所述的糖基化光子晶體水凝膠的制備方法，其特征在于：步驟2）中所用L-NH₂和丙烯酸的質量比為2-6:1；

加入混合液后的反應液中，1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞銨鹽和N-羥基硫代琥珀酰亞胺的總濃度為0.1wt%，其中1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞銨鹽和N-羥基硫代琥珀酰亞胺的質量比為1:1。

4.根據權利要求1所述的糖基化光子晶體水凝膠的制備方法，其特征在于：步驟3）中所用聚苯乙烯乳液的質量濃度為10-20%，其中聚苯乙烯微球的粒徑為700-900 nm。

5.根據權利要求1所述的糖基化光子晶體水凝膠的制備方法，其特征在于：步驟4）中加入的GAC與所用A液中丙烯酰胺的質量比為1:1-6，混合液攪拌的時間為1-5 min。

6.如權利要求1-5任一所述制備方法制得的糖基化光子晶體水凝膠。

7.一種如權利要求6所述的糖基化光子晶體水凝膠在流感病毒檢測中的應用，其特征在于：具體應用方法為：

a）將所述糖基化光子晶體水凝膠置于水中溶脹1.5 h，然后取出，用濾紙吸去表面游離水并保持水凝膠呈溶脹狀態，然后用激光筆照射位于桌子上方的糖基化光子晶體水凝膠，并記錄在桌面上顯示出的德拜環的直徑；

b）取10 μL系列濃度的流感病毒樣液分別滴在糖基化光子晶體水凝膠上并標記區域，靜置2h后水洗去標記區域內的殘留物，然后瀝干表面游離水并保持水凝膠呈溶脹狀態，再次測定桌面上顯示出的德拜環的直徑；

c）利用步驟a）、b）所得德拜環直徑的差值與流感病毒濃度的對數進行線性擬合，獲得反映兩者線性關系的回歸方程；

d）將待測流感病毒樣液按步驟b）進行操作，獲得其德拜環的直徑；

e）利用待測流感病毒樣液的德拜環直徑與步驟a）所得德拜環直徑的差值及獲得的回歸方程計算出待測流感病毒溶液的濃度。

8.根據權利要求7所述的糖基化光子晶體水凝膠在流感病毒檢測中的應用，其特征在于：所述流感病毒為H1N1、H3N2、H5N1中的任意一種。

9.根據權利要求7所述的糖基化光子晶體水凝膠在流感病毒檢測中的應用，其特征在于：所用激光筆為綠色激光筆，其波長為532 nm，功率為1000 mW；照射時，光源與水凝膠的垂直距離為20cm，水凝膠與桌面的垂直距離為10cm；所述流感病毒樣液的濃度為0.01~100ng/mL。