[發明專利]一種防治煙草花葉病毒的微生物制劑及其制備方法

有效

• 申請號: 202010612440.8
• 申請日: 2020-06-30
• 公開（公告）號: CN111771911B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 徐維烈;周繼鑫;詹巧春;楊濤;袁慶豐;汪杰;劉陽;張業成
• 申請（專利權）人: 武漢合緣綠色生物股份有限公司
• 主分類號: A01N63/22
• 分類號: A01N63/22;A01N63/20;A01N63/50;A01N65/38;A01P21/00;A01P1/00
• 代理公司: 武漢紅觀專利代理事務所(普通合伙) 42247
• 代理人: 張文俊

1.一種防治煙草花葉病毒的微生物制劑，其特征在于：包括微生物混合菌劑、植物免疫誘抗劑和葉片提取液，所述葉片提取液為噴淋植物免疫誘抗劑后產生免疫反應的煙草植株的葉片提取液，所述微生物混合菌劑、植物免疫誘抗劑和葉片提取液的質量百分比為微生物混合菌劑5%~10%、植物免疫誘抗劑3%~5%和葉片提取液10%~15%，余量為無菌水；其中，所述微生物混合菌劑包括解淀粉芽孢桿菌和植物乳桿菌，所述解淀粉芽孢桿菌和植物乳桿菌的質量比為（2~3）：（2~3）；所述植物免疫誘抗劑為煙草花葉病毒衣殼蛋白溶液。

2.根據權利要求1所述的一種防治煙草花葉病毒的微生物制劑，其特征在于：還包括表面活性劑，所述表面活性劑為吐溫80、有機硅或丁二酸二酯磺酸鈉。

3.根據權利要求2所述的一種防治煙草花葉病毒的微生物制劑，其特征在于：所述吐溫80的質量百分比為3％，或所述有機硅的質量百分比為2％，或所述丁二酸二酯磺酸鈉的質量百分比為1.5％。

4.根據權利要求2或3所述的一種防治煙草花葉病毒的微生物制劑的制備方法，其特征在于：包括以下步驟，

S1制備微生物混合菌劑各菌種的種子液，將所述種子液分別進行發酵擴繁，將所述擴繁產物按照配比均勻混合；

S2在煙草花葉病毒溶液中加入乙酸，混勻后靜置，離心去除RNA沉淀，然后將上清液經過脫鹽柱分離，去除乙酸，將所得到的溶液在去離子水中透析12至24h，離心，將所得到的沉淀用磷酸緩沖溶液復溶，得到煙草花葉病毒衣殼蛋白溶液；

S3使用所述步驟S2中獲得的煙草花葉病毒衣殼蛋白溶液噴淋煙草植株的葉片，待所述煙草植株產生免疫反應后，摘取植株葉片，粉碎后采用水提取法獲得提取混合液，然后濾除固體雜質得到葉片提取液；

S4將所述步驟S1至S3中的獲得產物按照配比均勻混合，得到混合溶劑；

S5向所述步驟S4中的混合溶劑內按照配比加入表面活性劑，攪拌1至2h即可。

5.根據權利要求4所述的一種防治煙草花葉病毒的微生物制劑的制備方法， 其特征在于：在所述步驟S3中，待向煙草植株的葉片噴淋煙草花葉病毒衣殼蛋白溶液1至2h后，提取葉片提取液，然后通過離子分離色譜和高效液相色譜的方法，從所述葉片提取液中分離出單一組分，并利用質譜鑒定的方法得到該單一組分的組成，以鑒定所述煙草植株是否產生免疫反應產物。