[發明專利]一種中國小麥花葉病毒CWMV的接種方法

有效

• 申請號: 202010608730.5
• 申請日: 2020-06-29
• 公開（公告）號: CN111713288B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 鐘凱麗;程曄;張帆;劉婷婷;劉芃;羊健;陳劍平
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: A01G7/00
• 分類號: A01G7/00
• 代理公司: 北京圣州專利代理事務所(普通合伙) 11818
• 代理人: 朱芳斌

本發明提供了一種中國小麥花葉病毒CWMV的接種方法，屬于植物病毒接種技術領域，所述接種方法，包括以下步驟：將莖葉總長度為4～8cm的小麥幼苗置于CWMV浸潤液中，在標準大氣壓下進行抽真空處理25～35min，然后將小麥幼苗移栽至土壤中進行培養；所述CWMV浸潤液包括CWMV RNA1、CWMV RNA2和P19沉默抑制子。本發明所述接種方法能夠顯著提高中國小麥花葉病毒CWMV在小麥上的接種率，接毒步驟簡單，能夠實現快速批量接種。

技術領域

本發明屬于植物病毒接種技術領域，尤其涉及一種中國小麥花葉病毒CWMV的接種方法。

背景技術

中國小麥花葉病毒(Chinese wheat mosaic virus，CWMV)是上世紀九十年代在我國山東冬小麥上鑒定的一種由禾谷多黏菌傳播的土傳病毒(Chen J.Annals of AppliedBiology,1993,123(1):55-61)近年來CWMV侵染的病區不斷擴大，導致小麥減產10％～30％，甚至是70％。2018年冬季由于雨水充足，低溫持續時間長，中國小麥花葉病毒病發病尤為嚴重。到目前為止尚未研究出有效且有針對性的防治土傳病毒病害的防治措施，生產上唯一有效的防治辦法是選育抗病品種，但抗性種質資源較匱乏，導致抗病品種的選育十分困難，以至于防控該病毒病害仍是世界性難題(陳劍平.浙江農業學報,2005,04:1004-1524)CWMV屬于帚狀病毒科的真菌傳桿狀病毒屬(Furovirus)，其最適侵染溫度為15-17℃，感染后的小麥表現出花葉、矮化、分蘗減少等癥狀。對CWMV的病毒粒子結構和基因組結構進行解析發現其為是單鏈正義RNA(ssRNA)病毒，包含RNA1和RNA2兩條基因組。目前，對CWMV的研究主要集中于病毒的分布、生物學特性、病害流行規律等方面，但對于CWMV的致病機制鮮少報道。植物病毒的成功感染源于復雜的分子結構寄主植物和入侵病毒之間的相互作用。為了研究寄主是如何識別和抵抗CWMV侵染，在實驗室條件下成功接種CWMV就顯得尤為重要。目前小麥接種CWMV病毒采用的是摩擦接毒的方法，由于摩擦接毒效率低，步驟繁瑣，且成本高導致小麥和CWMV互作的研究進展緩慢。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種中國小麥花葉病毒CWMV的接種方法，所述接種方法能夠顯著提高中國小麥花葉病毒CWMV在小麥上的接種率，接毒步驟簡單，能夠實現快速批量接種。

為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供了一種中國小麥花葉病毒CWMV的接種方法，包括以下步驟：將莖葉總長度為4～8cm的小麥幼苗置于CWMV浸潤液中，在標準大氣壓下進行抽真空處理25～35min，然后將小麥幼苗移栽至土壤中進行培養；

所述CWMV浸潤液包括CWMV RNA1、CWMV RNA2和P19沉默抑制子。

優選的，每一株小麥幼苗置于400～600μL的CWMV浸潤液中。

優選的，所述CWMV浸潤液以MES緩沖液為溶劑，其中CWMV RNA1、CWMV RNA2和P19沉默抑制子的OD₆₀₀比例為(0.8～1.2):(0.8～1.2):(0.8～1.2)。

優選的，所述CWMV RNA1、CWMV RNA2和P19沉默抑制子在所述CWMV浸潤液中的OD₆₀₀值分別為0.6～0.8，0.6～0.8和0.6～0.8。優選的，所述抽真空處理的時間為28～32min；所述抽真空處理過程中，每隔8～12min停止一次，去除CWMV浸潤液中的氣泡。

優選的，小麥幼苗移栽至土壤中培養的時間為7～28d。

優選的，所述培養的溫度為7～9℃，所述培養的光照周期L:D為14:10；所述培養的濕度為73％～78％。

優選的，所述小麥幼苗的培育方法包括以下步驟：將小麥種子在自來水中24～26℃浸泡10～14h后獲得芽頭露白的種子；將所述芽頭露白的種子保濕培養3～4d獲得小麥幼苗。