[發(fā)明專利]檢測(cè)人染色體數(shù)目的探針組合物、試劑盒和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010600228.X
• 申請(qǐng)日: 2020-06-28
• 公開（公告）號(hào): CN111635936A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 祝丹平;魏亮;肖書圣;解亞平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢友芝友醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6886;C12Q1/6827;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 周文波

本發(fā)明公開了一種檢測(cè)人染色體數(shù)目的探針組合物、試劑盒和應(yīng)用，涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明公開的探針組合物靶向人8號(hào)染色體著絲粒的第一探針組合和靶向人17號(hào)染色體著絲粒的第二探針組合。該探針組合物可以檢測(cè)人8和17號(hào)染色體數(shù)目，該探針組合物易于進(jìn)入細(xì)胞與靶區(qū)域雜交，雜交信號(hào)強(qiáng)度高，信噪比低，且特異性強(qiáng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種檢測(cè)人染色體數(shù)目的探針組合物、試劑盒和應(yīng)用。

背景技術(shù)

8號(hào)染色體跨越超過(guò)1.46億個(gè)DNA構(gòu)建塊(堿基對(duì))，占細(xì)胞總DNA的4.5％至5％。識(shí)別每條染色體上的基因是遺傳研究的一個(gè)活躍領(lǐng)域。由于研究人員使用不同的方法來(lái)預(yù)測(cè)每條染色體上的基因數(shù)量，因此估計(jì)的基因數(shù)量會(huì)有所不同。8號(hào)染色體含有約700個(gè)基因，這些基因所編碼的蛋白，在體內(nèi)發(fā)揮著各種不同的作用。8號(hào)染色體異常引起的相關(guān)疾病包括8p11骨髓增生綜合征，心結(jié)合因子急性髓性白血病以及8號(hào)染色體重組綜合征，另外8號(hào)染色體拷貝數(shù)異常在一切乳腺癌亞型中是經(jīng)常發(fā)生的，隨著臨床分期的進(jìn)展，8號(hào)染色體拷貝數(shù)異常的頻率增加。而且，8號(hào)染色體的拷貝異常與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，晚期胃癌，胰腺癌和肺癌的發(fā)生具有相關(guān)性。

現(xiàn)在，人17號(hào)染色體著絲粒探針主要作為HER-2/TOP2A等探針的內(nèi)標(biāo)探針在乳腺癌、胃癌臨床方面的起到很重要的作用。人類第17號(hào)染色體由大約8100萬(wàn)個(gè)堿基對(duì)構(gòu)成，含有1500多個(gè)基因，有許多與疾病相關(guān)的基因，如乳腺癌基因、神經(jīng)纖維瘤基因、遺傳性神經(jīng)紊亂基因等。乳腺癌臨床檢測(cè)中，HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)可指導(dǎo)用藥以及預(yù)后判斷，熒光原位雜交中常用HER2探針與人17號(hào)染色體著絲粒探針熒光數(shù)的比值來(lái)判斷待檢組織HER2基因擴(kuò)增狀態(tài)。

目前常用的人8/17號(hào)染色體著絲粒探針一般采用已提供序列的特異性重復(fù)單元序列標(biāo)記，但實(shí)際雜交效果較差，存在特異性較低，雜信號(hào)多，雜交背景差等缺點(diǎn)，這不利于臨床的正確診斷及治療。

鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供檢測(cè)人染色體數(shù)目的探針組合物、試劑盒和應(yīng)用。本發(fā)明提供的探針組合物可以檢測(cè)人8和17號(hào)染色體數(shù)目，該探針組合物易于進(jìn)入細(xì)胞與靶區(qū)域雜交，雜交信號(hào)強(qiáng)度高，信噪比低，且特異性強(qiáng)。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一方面，本發(fā)明提供一種檢測(cè)人染色體數(shù)目的探針組合物，所述探針組合物選自如下探針組合中的至少一種：

靶向人8號(hào)染色體著絲粒的第一探針組合，其包括：SEQ ID NO.2、5、6、7、10和11所示的探針或其互補(bǔ)的探針；

靶向人17號(hào)染色體著絲粒的第二探針組合，其包括：SEQ ID NO.16、19、20、21、26和27所示的探針或其互補(bǔ)的探針。

本發(fā)明的探針組合物根據(jù)人8號(hào)染色體著絲粒和人17號(hào)染色體著絲粒區(qū)域的高度特異性序列設(shè)計(jì)，探針組合物中的各探針長(zhǎng)度短，控制在10-20bp范圍內(nèi)，短片段的探針易于進(jìn)入細(xì)胞，提高雜交成功率；同時(shí)為了避免單條的短片段探針可能出現(xiàn)熒光信號(hào)弱的問題，增加每個(gè)探針組合中的探針數(shù)量，多個(gè)探針以組合形成與著絲粒靶區(qū)域雜交，有助于提高信號(hào)強(qiáng)度；且每個(gè)探針的序列都是經(jīng)過(guò)發(fā)明人的精心設(shè)計(jì)，確保其特異性強(qiáng)，避免探針與其他非靶區(qū)域雜交；采用本發(fā)明的探針組合物檢測(cè)人8號(hào)染色體和人17號(hào)染色體數(shù)目具有雜交信號(hào)強(qiáng)度高、特異性強(qiáng)、靈敏度高以及信噪比低等特點(diǎn)。

本發(fā)明的探針組合物可以僅包括第一探針組合或第二探針組合，也可以是包括第一探針組合和第二探針組合，當(dāng)其包括第一探針組合或第二探針組合是可以僅針對(duì)人8號(hào)染色體或17號(hào)染色體數(shù)目檢測(cè)；當(dāng)其包括第一探針組合和第二探針組合，兩個(gè)探針組合可以同時(shí)在同一體系中與各自的靶區(qū)域雜交，相互間不產(chǎn)生影響，同時(shí)對(duì)人8號(hào)染色體或17號(hào)染色體數(shù)目檢測(cè)，在提高檢測(cè)效率的同時(shí)，確保雜交特異性。