[發明專利]一種用于構建測序文庫的酶反應液及其應用

有效

• 申請號: 202010599034.2
• 申請日: 2020-06-28
• 公開（公告）號: CN111763664B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 曹林;聶俊偉;瞿志鵬;張力軍;韓錦雄;江明揚;邱翠
• 申請（專利權）人: 江蘇康科斯醫療科技有限公司;南京諾唯贊生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N9/16
• 分類號: C12N9/16;C12N9/12;C40B50/06
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種用于構建測序文庫的酶反應液，其特征在于，所述酶反應液包括酶組合物和反應緩沖液；

所述酶組合物包括核酸內切酶、DNA聚合酶、多聚核苷酸激酶和輔助蛋白；

所述反應緩沖液包括金屬鹽、底物和緩沖介質水溶液；

所述核酸內切酶包括DNaseI或SAN；

所述DNA聚合酶包括Taq DNA聚合酶，還包括T4 DNA聚合酶或大腸桿菌DNA聚合酶I；

所述多聚核苷酸激酶包括T4多聚核苷酸激酶；

所述輔助蛋白包括牛血清白蛋白和T4噬菌體單鏈結合蛋白；

所述金屬鹽包括金屬陽離子，所述金屬陽離子包括Mg²⁺、Mn²⁺、Na⁺和Ca²⁺；

所述底物包括dNTPs、dATP和ATP；

所述緩沖 介質包括4-羥乙基哌嗪乙磺酸或三羥甲基氨基甲烷；

所述DNaseI在所述酶反應液中的終濃度為0.005~0.01 U/μL；

所述SAN在所述酶反應液中的終濃度為0.005~0.01 U/μL；

所述Taq DNA聚合酶在所述酶反應液中的終濃度為0.01~0.05 U/μL；

所述T4 DNA聚合酶在所述酶反應液中的終濃度為0.05~1.0 U/μL；

所述大腸桿菌DNA聚合酶I在所述酶反應液中的終濃度為0.05~1.0 U/μL；

所述T4多聚核苷酸激酶在所述酶反應液中的終濃度為0.05~0.3 U/μL；

所述牛血清白蛋白在所述酶反應液中的終濃度為0.1~0.4 μg/μL；

所述T4噬菌體單鏈結合蛋白在所述酶反應液中的終濃度為0.05~0.5 μg/μL；

所述Mg²⁺在所述酶反應液中的終濃度為2~18 mM；

所述Mn²⁺在所述酶反應液中的終濃度為0.07~0.8 mM；

所述Na⁺在所述酶反應液中的終濃度為5~25 mM；

所述Ca²⁺在所述酶反應液中的終濃度為1~5 mM；

所述dNTPs在所述酶反應液中的終濃度為0.05~0.5 mM；

所述dATP在所述酶反應液中的終濃度為0.1~1 mM；

所述ATP在所述酶反應液中的終濃度為3~10 mM；

所述4-羥乙基哌嗪乙磺酸在所述酶反應液中的終濃度為10~40 mM；

所述三羥甲基氨基甲烷在所述酶反應液中的終濃度為10~40 mM。

2.根據權利要求1所述的酶反應液，其特征在于，所述酶反應液包含三羥甲基氨基甲烷、MgCl₂、CaCl₂、NaCl、MnCl₂、dNTPs、dATP、ATP、T4 PNK、BSA、T4 GP32、DNaseI、Taq DNA聚合酶、T4 DNA聚合酶和甘油。

3.根據權利要求2所述的酶反應液，其特征在于，所述酶反應液包含三羥甲基氨基甲烷10~40 mM、MgCl₂ 2~18 mM、CaCl₂ 1~5 mM、NaCl 5~25 mM、MnCl₂ 0.07~0.8 mM、dNTPs 0.05~0.5 mM、dATP 0.1~1 mM、ATP 3~10 mM、T4 PNK 0.05~0.3 U/μL、BSA 0.1~0.4 μg/μL、T4GP32 0.05~0.5 μg/μL、DNaseI 0.005~0.01 U/μL、Taq DNA聚合酶0.01~0.05 U/μL、T4 DNA聚合酶0.05~1.0 U/μL和甘油。