[發明專利]豬圓環病毒2型Cap蛋白及其編碼基因與應用在審
| 申請號： | 202010597309.9 | 申請日： | 2020-06-28 |
| 公開（公告）號： | CN113845575A | 公開（公告）日： | 2021-12-28 |
| 發明（設計）人： | 孫娜;姜俊兵;范闊海;李宏全;孫耀貴;尹偉;孫盼盼 | 申請（專利權）人： | 山西農業大學 |
| 主分類號： | C07K14/01 | 分類號： | C07K14/01;C07K1/22;C12N15/34;C12N15/81;A61K39/12;A61P31/20 |
| 代理公司： | 太原科衛專利事務所(普通合伙) 14100 | 代理人： | 張彩琴;李曉娟 |
| 地址： | 030801 山西*** | 國省代碼： | 山西;14 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 圓環 病毒 cap 蛋白 及其 編碼 基因 應用 | ||
【權利要求書】：
1.豬圓環病毒2型Cap蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.權利要求1所述豬圓環病毒2型Cap蛋白在制備豬圓環病毒2型疫苗中的應用。
3.權利要求1所述豬圓環病毒2型Cap蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
表達載體的構建：人工合成的Cap的基因序列上設計有限制性內切酶的酶切位點，將Cap的基因序列和表達質粒pwPICZalpha用同樣的限制性內切酶酶切后連接在一起，通過雙酶切檢測和篩選含有Cap的基因序列的克隆；
酵母表達系統的構建：使用限制性內切酶線性化重組表達質粒，通過電轉化的方法，將Cap的基因序列整合到酵母的基因組中；將轉化后的菌體懸液涂布于含有Zeocin的YPD平板上，30℃培養；挑取單單菌落，進行小劑量的誘導表達，SDS-PAGE檢測表達上清確認陽性克隆；
重組蛋白的純化和活性檢測：挑選陽性克隆菌落進行大劑量的誘導表達，表達上清采用Protein Pure Ni-NTA 樹脂純化，通過SDS-PAGE和Western blot檢測純化的重組蛋白。
4.豬圓環病毒2型Cap蛋白的編碼基因，其堿基序列如SEQ ID NO:1所示。
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