[發明專利]特高濃啤酒酵母菌株的高效選育方法

有效

• 申請號: 202010596725.7
• 申請日: 2020-06-28
• 公開（公告）號: CN111647546B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發明（設計）人: 尹花;董建軍;余俊紅;陳璐;萬秀娟;趙玉祥;陳嶸;侯曉平;賀揚
• 申請（專利權）人: 青島啤酒股份有限公司
• 主分類號: C12N1/36
• 分類號: C12N1/36;C12N1/18;C12C11/02;C12R1/85
• 代理公司: 青島清泰聯信知識產權代理有限公司 37256
• 代理人: 張潔

本發明提出一種特高濃啤酒酵母菌株的高效選育方法，屬于菌株選育領域。該選育方法包括：篩選出發菌株、篩選初篩菌株、初篩菌株的適應性進行培養及菌株評價試驗等步驟。利用本發明提供的高效選育方法篩選得到一株特高濃啤酒酵母菌株TG?01，其保藏編號為CGMCC No.19839，于2020年05月26日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。本發明通過通過建立特定脅迫條件高效篩選和適應性進化篩選相結合的方法，將2?脫氧?D?葡萄糖、山梨醇及酒精三者結合在一起模擬出高于大生產的特高濃發酵環境的脅迫條件，能夠進一步定向高效的篩選出對葡萄糖不敏感、耐高滲、耐酒精的目標菌株。在菌株選育領域具有十分廣闊的應用前景。

技術領域

本發明屬于菌株選育領域，尤其涉及一種特高濃啤酒酵母菌株的高效選育方法。

背景技術

超高濃釀造技術是國內外啤酒行業發展的新趨勢，可大幅度降低能耗、提高設備利用率，且麥汁濃度越高，優勢越突出。與高濃釀造相比，特高濃釀造(≥22°P)對酵母菌株提出了更高的技術要求和難度，如特高濃麥汁、高滲透壓等環境會影響酵母正常的生理生化特征，降低酵母活力及發酵性能，最終影響啤酒的風味及協調性。因此實現特高濃釀造技術的前提是選育出能夠適用于發酵特高濃麥汁、抵抗高滲透壓、高酒精度且性能良好的酵母。目前，國內有報道通過化學誘變、培養分離、高酒精環境馴化等方法篩選出能發酵28°P特高濃麥汁的酵母菌株，該方法不僅存在發酵周期較長、步驟繁瑣、篩選效率低等缺陷，同時難以適應更高濃度的麥汁發酵環境。因此，如何開發出一種操作簡便、性能良好、篩選效率高的特高濃啤酒酵母菌株的高效選育方法是本領域技術人員亟待解決的一項課題。

發明內容

本發明針對現有技術中存在的發酵周期較長、步驟繁瑣、篩選效率低等問題，提出一種操作簡便、篩選效率高、性能良好的的特高濃啤酒酵母菌株的高效選育方法。

為了達到上述目的，本發明采用的技術方案為：

特高濃啤酒酵母菌株的高效選育方法，所述方法具體步驟如下：

將備選菌株涂布于添加乙醇和山梨醇的YPD固體培養基上，根據所述備選菌株的生長速度，篩選得到出發菌株；

將所述出發菌株在YPD液體培養基中培養，將菌懸液涂布于初篩培養基上待其長出單菌落后，挑取單菌落轉至低濃度麥汁中培養，得到初篩菌株；

對所述初篩菌株進行適應性進化培養，得到復篩菌株；

對所述復篩菌株進行菌株評價試驗，根據其生長速度，篩選得到特高濃啤酒酵母菌株。

作為優選，所述適應性進化復篩步驟具體為：

將所述初篩菌株接種至添加特高濃麥汁的麥汁培養基中培養后，將菌液加入全自動高通量微生物液滴培養儀中，在適應性進化模式下培養，生成液滴；

將所述液滴轉入添加乙醇的麥汁培養基中，通過提高乙醇的濃度，進行菌株馴化，根據其生長速度，篩選得到復篩菌株。

作為優選，所述特高濃麥汁的濃度為26-32°P，所述麥汁培養基中無水乙醇的添加量為6-16％。

作為優選，所述特高濃麥汁是通過以下方法制備得到的：

通過向20°P普通麥汁中添加糖漿和氨基氮富集劑，以調整麥汁糖度和氨基氮含量，得到濃度為26-32°P的特高濃麥汁；

其中，所述特高濃麥汁中氨基氮的含量為300-350mg/L。

作為優選，所述添加酒精和山梨醇的YPD固體培養基配方為：酵母浸出物0.5-2％、蛋白胨1-3％、麥芽糖0.5-2％、無水乙醇6-10％、山梨醇20-30％、瓊脂2％；

YPD液體培養基配方為：酵母浸出物0.5-2％、蛋白胨1-3％、麥芽糖 0.5-2％；