[發明專利]一種酶底物法大腸菌群檢測試劑的制備方法

在審

• 申請號: 202010596281.7
• 申請日: 2020-06-28
• 公開（公告）號: CN111763709A
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發明（設計）人: 高凱斐;胡美珠;沈志林;趙贏;葉大林
• 申請（專利權）人: 浙江泰林生命科學有限公司
• 主分類號: C12Q1/10
• 分類號: C12Q1/10;C12Q1/06;C12Q1/04;C12R1/19
• 代理公司: 杭州凱知專利代理事務所(普通合伙) 33267
• 代理人: 金盟

本發明公開了一種酶底物法大腸菌群檢測試劑及制備方法，酶底物法大腸菌群檢測試劑由營養劑、指示劑、細菌生長緩沖劑、無機鹽緩沖劑、PH調節劑、選擇性抑制劑組成，利用大腸菌群能產生β?半乳糖苷酶（β?D?galactosidase）分解無色底物鄰硝基苯?β?D?吡喃半乳糖苷ONPG（Orthonitrophenyl?β?D?galactopyranoside）使培養液呈黃色，根據最大可能數法（MPN法）來計算水中總大腸菌群、糞大腸菌群及大腸埃希氏菌的濃度。本發明以水質大腸菌群檢測為目的，以酶底物法原理為核心，通過在酶底物法基礎反應物質中添加營養劑、細菌生長緩沖劑、PH調節劑、選擇性抑制劑等催化酶底物法反應的物質，使酶底物法檢測大腸菌群試劑檢測結果靈敏有效，檢測效率提高，反應結果顯示準確清晰。

技術領域

本發明涉及一種酶底物法大腸菌群檢測試劑的制備方法。

背景技術

水體中微生物污染的主要來源是土壤以及人類、動物的排泄物，排泄物中因含有致病微生物，會導致某些腸道傳染病的傳播，對水體的污染影響較大。實際工作中，我們無法對水體中所有的微生物進行檢測，一般選用一種或一類微生物作為指示菌進行檢測，以此反映水體微生物污染情況。目前，總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌，作為衛生質量的重要指標，已被廣泛應用于水質、食品衛生安全評價中。

根據現有國標中MMO-MUG培養基配方配制的培養基能夠同時對水中的總大腸菌群和大腸埃希氏菌進行檢測，但整體檢測效果不佳，存在反應延后、顏色反應結果顯示不清晰、熒光反應分布不均勻、檢測結果靈敏度較低等問題。因此，需要開發出一種酶底物法大腸菌群檢測試劑，根據酶底物法原理，能夠比普通MMO-MUG培養基有更高的靈敏度，更準確的結果，更高的檢測效率。

發明內容

本發明為解決現有技術在使用中存在的問題，提供一種可檢測大腸菌群、試劑檢測結果靈敏有效、檢測效率提高、反應結果顯示準確清晰的酶底物法大腸菌群檢測試劑及制備方法。

本發明解決現有問題的技術方案是：一種酶底物法大腸菌群檢測試劑，該檢測試劑由營養劑、指示劑、細菌生長緩沖劑、無機鹽緩沖劑、PH調節劑、選擇性抑制劑組成。所述的營養劑由重量為1.0-8.0g的蛋白胨組成。所述的指示劑由重量為0.2-0.85g的鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）和0.2-0.82g的4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG）組成。所述的細菌生長緩沖劑由重量為1.0-8.0g的N-2羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸鈉鹽和6.0-13.0g的N-2羥乙基哌嗪-N-乙磺酸組成。所述的無機鹽緩沖劑由重量為1.0-5.0g的硫酸銨、0.2-0.7g的硫酸鎂、0.0001-0.01g的硫酸鋅和0.001-0.1g的亞硫酸鈉組成。所述的PH調節劑由重量為1.0-3.0g的磷酸氫二鉀和0.1-0.3g的氫氧化鈉組成。所述的選擇性抑制劑由重量為0.0002-0.02g的苯甲酸鈉組成。

作為進一步的優選，所述的營養劑由重量為2.0-6.0g的蛋白胨組成。

所述的指示劑由重量為0.3-0.65g的鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷（ONPG）和0.35-0.6g的4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG）組成。所述的細菌生長緩沖劑由重量為1.5-6.5g的N-2羥乙基哌嗪-N-2-乙磺酸鈉鹽和7.0-12.0g的 N-2羥乙基哌嗪-N-乙磺酸組成。所述的無機鹽緩沖劑由重量為1.8-5.5g的硫酸銨、0.3-0.6g的硫酸鎂、0.0009-0.0011g的硫酸鋅和0.0095-0.012g的亞硫酸鈉組成。所述的PH調節劑由重量為1.3-2.6g的磷酸氫二鉀和0.13-0.28g的氫氧化鈉組成。所述的選擇性抑制劑由重量為0.0012-0.028g的苯甲酸鈉組成。

作為進一步的優選，所述的營養劑由重量為3.0-5.0g的蛋白胨組成。