[發(fā)明專利]一種基于反相HPLC分離二氫楊梅素和其(2S,3S)手性異構(gòu)體的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010595272.6
• 申請日: 2020-06-28
• 公開（公告）號: CN111721873A
• 公開（公告）日: 2020-09-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于海濤;楊曉旭
• 申請（專利權(quán)）人: 南京賽爾健生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;B01D15/32
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本發(fā)明公開了一種基于反相HPLC分離二氫楊梅素和其(2S,3S)手性異構(gòu)體的方法，包括如下參數(shù)：色譜柱：C18柱；流動相A相：由甲醇?四氫呋喃?水按體積比8:2:90混合而成，并添加終濃度為200μg/mL的4?氟?DL?苯丙氨酸，臨用現(xiàn)配；流動相B相：由甲醇?四氫呋喃?水按體積比35:5:60混合而成，并添加終濃度為200μg/mL的4?氟?DL?苯丙氨酸，臨用現(xiàn)配；洗脫方式：梯度洗脫；流動相流速：0.9mL/min；柱溫：30℃。本發(fā)明只需要常規(guī)的C18反相硅膠柱即可有效分離二氫楊梅素和其(2S,3S)手性異構(gòu)體，無需手性色譜柱，成本低。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物分析領(lǐng)域，具體涉及一種基于反相HPLC分離二氫楊梅素和其(2S,3S)手性異構(gòu)體的方法。

背景技術(shù)

二氫楊梅素(Dihydromyricetin，DMY)是一種二氫黃酮醇類化合物，存在于多種天然植物中，具有多種生物活性。二氫楊梅素含有兩個(gè)手性中心，植物來源以(2R,3R)-DMY為主，但在高溫、重結(jié)晶或存在金屬離子等時(shí)，天然的(2R,3R)-DMY容易發(fā)生消旋化，形成(2R,3R)-DMY和(2S,3S)-DMY的混合物。(2R,3R)-DMY和(2S,3S)-DMY化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下。

由于(2R,3R)-DMY的生物活性顯著優(yōu)異于(2S,3S)-DMY，為了提高(2R,3R)-DMY的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，控制(2R,3R)-DMY產(chǎn)品中(2S,3S)-DMY的含量，有必要建立一種分離(2R,3R)-DMY和(2S,3S)-DMY的方法。

阮麗君等提供了一種HPLC測定二氫楊梅素手性異構(gòu)體含量的方法，但是，該方法采用了EnantioPakAD手性柱才將二者分離(HPLC測定二氫楊梅素手性異構(gòu)體含量方法學(xué)研究，今日藥學(xué)2019年12月第29卷第12期)。因?yàn)镋nantioPakAD手性柱較為昂貴，且使用壽命短，所以阮麗君等提供的方法顯然成本高。

手性流動相色譜法是一種采用添加了手性試劑的流動相進(jìn)行手性異構(gòu)體(對映體)分離的色譜技術(shù)。該方法使用普通填料的色譜柱即可實(shí)現(xiàn)手性異構(gòu)體(對映體)的分離，成本低。

目前未見手性流動相色譜法成功用于(2R,3R)-DMY和(2S,3S)-DMY的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷和不足，提供一種基于反相HPLC分離二氫楊梅素和其(2S,3S)手性異構(gòu)體的方法。

實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下：

一種基于反相HPLC分離二氫楊梅素和其(2S,3S)手性異構(gòu)體的方法，包括如下HPLC色譜參數(shù)：

色譜柱：C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；

流動相A相：由甲醇-四氫呋喃-水按體積比8:2:90混合而成，并添加終濃度為200μg/mL的4-氟-DL-苯丙氨酸，臨用現(xiàn)配；

流動相B相：由甲醇-四氫呋喃-水按體積比35:5:60混合而成，并添加終濃度為200μg/mL的4-氟-DL-苯丙氨酸，臨用現(xiàn)配；

洗脫方式：梯度洗脫；

洗脫程序：0→10min，0％B→45％B；10→20min，45％B；20→25min，45％B→0％B；25→30min，0％B；

流動相流速：0.9mL/min；

柱溫：30℃。

根據(jù)上述的基于反相HPLC分離二氫楊梅素和其(2S,3S)手性異構(gòu)體的方法，色譜柱優(yōu)選DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)。

根據(jù)上述反相HPLC分離二氫楊梅素和其(2S,3S)手性異構(gòu)體的方法，檢測波長為290nm。