[發明專利]一種超聲輔助離子液體分散液液微萃取HPLC法檢測抗艾藥含量的方法

有效

• 申請號: 202010595199.2
• 申請日: 2020-06-26
• 公開（公告）號: CN111999396B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 龔愛琴;錢琛;劉玉婷
• 申請（專利權）人: 揚州工業職業技術學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 于躍

本發明涉及一種超聲輔助離子液體分散液液微萃取HPLC法檢測抗艾藥含量的方法。在超聲幫助下，無需分散劑疏水性離子液體1?辛基?3?甲基咪唑六氟磷酸鹽([C₈mimPF₆])即可形成細小的液滴分散在樣品溶液中，從而有效萃取分析ACC007，萃取率在94.0％以上。對實驗條件如萃取劑的種類和用量、萃取時間、萃取溫度、溶液pH、冷卻時間和離心時間等進行了優化。在優化條件下，標準工作曲線Y＝10.735x?0.328(r＝0.9994)的線性范圍為0.50?30.0μg/mL，檢測限分別為0.072μg/mL(藥片)和0.10μg/mL(血清)，加標回收率為90.5％?103.4％。

技術領域

本發明屬于藥物分析領域，具體涉及一種超聲輔助離子液體分散液液微萃取HPLC法檢測抗艾藥含量的方法。

背景技術

艾滋病又名獲得性免疫缺陷綜合征，是由人免疫缺陷病毒感染而導致的致死性較高的一種疾病。目前國際上治療艾滋病的藥物有6大類30多種，分別為核苷類逆轉錄酶、非核苷類逆轉錄酶、蛋白酶、整合酶、融合酶和CCR5抑制劑。ACC007屬于第三代口服非核苷類逆轉錄酶抑制劑，其結構：中文名為3-{[3-乙基-2,6-二氧-5-(丙基-2-基)-1,2,3,6-四氫嘧啶-4-基]羰基}-5-甲基苯腈。作為一類抗艾滋病新藥，ACC007具有優良的抗病毒活性和很好的安全性。關于ACC007含量的測定方法，目前報道的很少。文獻調研顯示黃潔瓊研究了用LC-MS/MS法測定復方制劑和比格犬血漿中的ACC007，但液質聯用儀價格較高一般實驗室難以普及。當分析基體比較復雜物質含量較低的樣品時，常需結合使用分離富集技術。近來分析化學的發展趨勢是向著簡單化、微型化、有機試劑消耗最小化方向發展，其中液相微萃取技術已經顯示了高的樣品萃取能力和富集效果。近來疏水性離子液體由于具有在水中溶解度小、揮發性低、毒性低對環境友好等特點，已被用來取代傳統的有機溶劑而作為萃取劑使用。當使用離子液體作為萃取劑時，由于離子液體黏度較大，為了改善離子液體在樣品溶液中的分散效果以提高萃取率，常需使用一定的分散劑如甲醇^]、乙腈、丙酮^]等。這些試劑的使用會增大有機試劑消耗量。如使用超聲能量對溶液進行超聲時，溶液中會形成亞微米尺寸的液滴，互不相溶的兩相間接觸面會增大從而加速物質的轉移，有時甚至不用分散劑也可獲得很高的萃取率，從而可減少有機溶劑的使用。

本發明首次提出了用超聲輔助離子液體分散液液微萃取HPLC法測定人血清及藥物中ACC007的含量。實驗結果表明在超聲的作用下，不需要使用任何分散劑萃取率在94.0％以上。申請人在先申請中還記載了一種紫外分光度測定法(中國發明專利申請號：202010396593.3)。

發明內容

本發明提供一種超聲輔助離子液體分散液液微萃取HPLC法檢測抗艾藥ACC007含量的方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)萃取：在10.0mL離心管中，分別加入2.0mL pH 4.5乙酸-乙酸鈉緩沖溶液、適量的待測ACC007樣品溶液、80μL離子液體，加蒸餾水至刻度線(即定容至10mL)，超聲10min后，將離心管冷卻至5℃，并保持5℃15min，再用離心機離心5min后，分層，去除上層水溶液，將下層離子液體相用乙醇稀釋至1.0mL，得待測液；

(2)檢測：取步驟(1)得到的待測液，用HPLC法測定ACC007的峰面積；

(3)計算含量：將步驟(2)測得的峰面積，代入標準工作曲線方程即得ACC007的含量。

步驟(1)中離子液體選自1-辛基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽[C₈mimPF₆]；超聲頻率選自40kHz；離心轉速選自2500r/min，離心時間優選5min。所述待測ACC007樣品溶液為ACC007樣品的乙醇溶液，其用量優選100-200μL，進一步優選100μL。