[發(fā)明專利]一種植物組培苗內(nèi)生菌的控制方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010595196.9
• 申請(qǐng)日: 2020-06-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111642398A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周志疆;陳雯雯;楊斌;相鴻雁;楊佩娟;莊錦貴;張楨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇豐收大地種業(yè)發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 南京北辰聯(lián)和知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32350
• 代理人: 陸中丹

1.一種植物組培苗內(nèi)生菌的控制方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

(1)采取外植體：在晴朗干燥的天氣，氣溫在15～25℃，相對(duì)濕度低于60％，采取外植體備用；

(2)外植體表面消毒：將采取的所述外植體依次進(jìn)行酒精消毒、滲透性消毒劑A溶液浸泡消毒和氯化汞消毒浸泡消毒；

(3)外植體接種和誘導(dǎo)組培苗：配制外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將所述步驟(2)消毒好的所述外植體接入具有經(jīng)殺菌劑殺菌且消毒后的所述外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)基瓶?jī)?nèi)，在無(wú)菌培養(yǎng)室內(nèi)有光照的條件下進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)；

(4)繼代培養(yǎng)：再使用步驟(3)中所述外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，進(jìn)行二代繼代培養(yǎng)；

(5)無(wú)內(nèi)生菌組培苗的獲得：經(jīng)過(guò)二代繼代培養(yǎng)后，選取生長(zhǎng)健壯、無(wú)任何細(xì)菌真菌污染組培苗即為無(wú)內(nèi)生菌種苗。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組培苗內(nèi)生菌的控制方法，其特征在于，所述步驟(2)中，將采取的所述外植體在自來(lái)水流水沖洗2小時(shí)，然后用無(wú)菌水漂洗2遍，再放入75％酒精中浸泡1分鐘，然后取出用無(wú)菌水漂洗4遍；再將所述外植體投入到配置好的所述滲透性消毒劑A溶液內(nèi)，浸泡20分鐘，取出用無(wú)菌水漂洗4遍；再投入濃度為0.1％的HgCl消毒溶液內(nèi)浸泡30分鐘，再使用無(wú)菌水漂水漂洗6遍。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的植物組培苗內(nèi)生菌的控制方法，其特征在于，所述步驟(2)中所述滲透性消毒劑A溶液的配置方法為：取500ml的無(wú)菌水倒入燒杯，分別加入化學(xué)殺菌劑C溶液1ml和MT藥劑一片溶解后即配制完成。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組培苗內(nèi)生菌的控制方法，其特征在于，所述步驟(3)中的所述外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基為無(wú)激素培養(yǎng)基MS0，配置所述外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基后再加入殺菌劑攪拌均勻，然后將所述外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基灌裝培養(yǎng)瓶，每瓶接入3～6株，后放入高壓消毒鍋內(nèi)118～121℃消毒19～21分鐘。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的植物組培苗內(nèi)生菌的控制方法，其特征在于，所述殺菌劑的配置方法為：采用生物抑菌劑B和化學(xué)殺菌劑C，按1:1～2混合，然后加入所述外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述殺菌劑在所述外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基內(nèi)濃度為0.8～1.2ml/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組培苗內(nèi)生菌的控制方法，其特征在于，所述步驟(1)采取外植體前先將植物移栽到花盆里，放在溫室內(nèi)，溫度控制在20～35℃生長(zhǎng)，并在取外植體前一周噴施多菌靈50％可濕性粉劑300～500倍稀釋液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組培苗內(nèi)生菌的控制方法，其特征在于，所述步驟(4)中，連續(xù)二代繼代培養(yǎng)過(guò)程中，若發(fā)現(xiàn)受污染的組培苗則立刻將受污染的組培苗從無(wú)菌培養(yǎng)室除去。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組培苗內(nèi)生菌的控制方法，其特征在于，所述步驟(4)中，待帶有生長(zhǎng)點(diǎn)的芽段長(zhǎng)到3cm以上高度時(shí)，再使用步驟(3)中所述外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，進(jìn)行連續(xù)二代繼代培養(yǎng)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所屬的植物組培苗內(nèi)生菌的控制方法，其特征在于，所述步驟(1)中所述外植體為大蒜或草莓或紅薯或南天竹，采取所述外植體的方法為：將已消毒的大蒜或草莓或紅薯或南天竹，用火焰消毒過(guò)的刀片或剪刀或鑷子，在無(wú)菌的環(huán)境下，將生長(zhǎng)點(diǎn)以下1cm處切下，帶有生長(zhǎng)點(diǎn)的莖段即為外植體。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組培苗內(nèi)生菌的控制方法，其特征在于，所述步驟(3)中將所述外植體接入消毒好的具有所述外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)基瓶?jī)?nèi)，在室溫24～26℃條件下，2000～2500Lux光照強(qiáng)度，光照時(shí)間為12-16小時(shí)/天的無(wú)菌培養(yǎng)室進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)不定芽，培養(yǎng)周期為25-35天。