[發明專利]抗蟲抗除草劑玉米轉化事件及其創制方法和檢測方法有效
| 申請號： | 202010594846.8 | 申請日： | 2016-02-18 |
| 公開（公告）號： | CN111926097B | 公開（公告）日： | 2022-08-09 |
| 發明（設計）人： | 邱龍;楊倩倩;安吉翠;聶東明;王勇;佘秋明;許潔婷;孫出;吳晶晶;劉博林;馬崇烈;章旺根 | 申請（專利權）人： | 中國種子集團有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11;C12N15/82;A01H5/00;A01H5/10;A01H6/46 |
| 代理公司： | 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204 | 代理人： | 王達佐;洪欣 |
| 地址： | 100045 北京市西*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 抗蟲抗 除草劑 玉米 轉化 事件 及其 創制 方法 檢測 | ||
1.玉米轉化事件外源插入核酸分子的側翼核酸分子，其包含選自SEQ ID No:3或SEQID No:4所示的核苷酸序列或其互補序列。
2.用于檢測玉米轉化事件的引物，其中所述引物選自SEQ ID No:5和SEQ ID No:6以及SEQ ID No:7和SEQ ID No:8所示的核苷酸序列或其互補序列。
3.用于檢測玉米轉化事件的試劑盒或微陣列，其包含權利要求2所述的引物。
4.權利要求2所述的引物或者權利要求3所述的試劑盒或微陣列在檢測玉米轉化事件中的應用。
5.檢測玉米轉化事件的方法，其包括采用權利要求2所述的引物或者采用權利要求3所述的試劑盒或微陣列來檢測待測樣品中是否存在所述玉米轉化事件。
6.如權利要求5所述的方法，其包括以下步驟：
1) 提取待測樣品的總DNA；
2) 以步驟1)提取的總DNA為模板，采用權利要求2所述的引物或者采用權利要求3所述的試劑盒或微陣列來進行PCR擴增、實時PCR擴增、或Southern雜交；
3) 分析步驟2)的PCR擴增產物，實時PCR擴增曲線或Southern雜交結果，以確定待測樣品中是否存在所述玉米轉化事件。
7.對玉米進行育種的方法，所述方法包括以下步驟：
1) 利用創制玉米轉化事件的方法獲得包含轉化事件的玉米，所述創制玉米轉化事件的方法包括將核酸分子作為外源插入核酸分子導入玉米的基因組中，所述核酸分子包含SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的核苷酸序列，或其互補序列；
2) 將步驟1)所獲得的玉米與另一玉米品系進行雜交和回交；
3) 對步驟2)所獲得的植株進行抗除草劑和抗蟲鑒定，并利用權利要求5或6所述的方法來檢測其中是否存在所述轉化事件。
8.如權利要求7所述的方法，其包括采用包含所述核酸分子的表達載體，或包含所述核酸分子或所述表達載體的宿主細胞來獲得所述包含轉化事件的玉米。
9.如權利要求8所述的方法，其中所述表達載體為如圖1所示的表達載體。
10.如權利要求8所述的方法，其中所述宿主細胞為微生物細胞。
11.如權利要求8所述的方法，其中所述宿主細胞為農桿菌。
12.如權利要求7至11中任一項所述的方法，其中所述創制玉米轉化事件的方法包括以下步驟：
1) 改造草銨膦抗性基因
2) 人工合成草銨膦抗性基因
3) 將步驟2)中合成的基因與草甘膦抗性基因
4) 將步驟3)中構建的表達載體通過農桿菌介導的轉化方法導入到玉米中；
5) 對步驟4)中獲得的玉米轉化體進行分子鑒定，選取單拷貝插入的植株。
13.如權利要求12所述的方法，其中在步驟4)中，將步驟3)中構建的表達載體通過農桿菌介導的轉化方法導入玉米的種子、花粉、雌蕊、葉、根、或莖中。
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