[發明專利]一種BNP化學發光檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202010592531.X
• 申請日: 2020-06-24
• 公開（公告）號: CN111912838B
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發明（設計）人: 章思思;張聞;陳媛;周海濱;周廣亮
• 申請（專利權）人: 寧波瑞源生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 寧波市鄞州盛飛專利代理事務所(特殊普通合伙) 33243
• 代理人: 洪珊珊;王玲華

本發明涉及一種BNP化學放光檢測試劑盒及其應用，屬于醫學檢測技術領域。本發明通過封閉處理將磁珠上未交聯上抗體的結合位點封閉，不僅避免了磁珠較強的假陽性，還降低了檢測過程中結塊及附壁現象，從而達到優化了磁珠標記抗體步驟，改善了試劑性能的目的；本發明還優化了磁珠保存工作液的成分和條件，延長了試劑的穩定性和保存時間。

發明領域

本發明涉及一種BNP化學發光檢測試劑盒及其應用，屬于醫學檢測技術領域。

背景技術

BNP(腦利鈉肽)是一種多肽類神經激素，具有排鈉利尿、舒張血管以及抗腎素的作用，可以作為一種有效的心肌損傷的標志物，預示心室壓力增高狀況，對于充血性心力衰竭及其引發的呼吸困難并發癥，原發性高血壓，評價左心室功能障礙等心血管相關疾病的輔助診斷及治療評估檢測中具有重要價值。

心肌細胞受刺激后，產生含134個氨基酸的B型利鈉肽原前體(Pre-proBNP)，隨后形成含108個氨基酸的BNP前體(proBNP)，后者在內切酶的作用下裂解為含有76個氨基酸、無生物活性的NT-proBNP和含有32個氨基酸、有活性的B型利鈉肽(BNP)。BNP、NT-proBNP及未裂解的proBNP均會被釋放進入外周循環。進入外周循環后，BNP會被有效的清除，半衰期約為20min。

BNP化學發光檢測試劑在檢測過程中，磁珠標記抗體(特別是加入抗體之后)容易發生結塊、附壁,增加操作時間和難度，在檢測空白樣本時，會發生非特異性吸附，降低靈敏度。此外磁珠標記的抗體長期保存也會出現結塊、附壁、沉降的情況，這大大影響了試劑的穩定性。

發明內容

針對上述檢測方法存在的現有問題，本發明提供一種BNP化學發光檢測試劑盒及其應用，解決了磁珠標記抗體容易發生結塊、附壁問題，減小了操作時間和難度。

本發明的目的通過如下技術方案來實現：

一種BNP化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述BNP化學發光檢測試劑盒包括：包被BNP單克隆抗體的磁珠混合溶液、BNP校準品溶液、吖啶酯標記的BNP單克隆抗體溶液、清洗液、激發液。

本發明提供的一種BNP化學發光檢測試劑盒及制備方法和應用，該試劑檢測原理為雙抗夾心法，包括磁珠標記的BNP單克隆抗體，和吖啶酯標記的BNP單克隆抗體。將生物樣本(血清、血漿、全血)、吖啶酯標記的BNP單克隆抗體溶液與磁珠標記的BNP單克隆抗體溶液混合，雙抗夾心的混合物在磁場的作用下被固定，其余吖啶酯標記的抗體被清洗棄去，加入啟光劑，激發化學反應，收集光信號。

在上述一種BNP化學發光檢測試劑盒中，所述包被BNP單克隆抗體的磁珠混合溶液制備方法為：先對磁珠進行活化交聯BNP單克隆抗體，再對活化交聯BNP單克隆抗體的磁珠進行封閉處理，清洗分離后用保存緩沖液保存。

在上述的一種BNP化學發光檢測試劑盒中，所述封閉處理中使用3-巰基丙酸和氨基胍半硫酸鹽溶液。

在上述的一種BNP化學發光檢測試劑盒中，3-巰基丙酸和氨基胍半硫酸鹽的質量比為(1-3)：1。

磁珠在交聯上抗體后，用氨基胍半硫酸鹽和3-琉基丙酸進行后處理，一方面可以封閉磁珠上未交聯上抗體的結合位點，另一方面可以形成極性單層，排布在磁珠表面。這樣可以改變磁珠的帶電情況，極大的減少了結塊和附壁現象，同時還可以減弱血清非特異性吸附。羧基磁珠經過活化交聯后，可能有一些位點沒被抗體結合上(抗體呈Y字形，存在空間位阻)，而氨基胍半硫酸鹽和3-琉基丙酸分子空間結構小，可以封閉上這些位點。另一方面通過氨基胍半硫酸鹽上的-NH₂與3-琉基丙酸上的-COOH基團反應，形成網狀極性單層，在本發明的保存緩沖液中，磁珠帶上同種電性，彼此有排斥作用，不利于結塊與附壁。