[發明專利]一種馬氏珠母貝Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制劑基因、編碼的蛋白質和應用

有效

• 申請號: 202010589360.5
• 申請日: 2020-06-24
• 公開（公告）號: CN111690054B
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發明（設計）人: 梁海鷹;何軍軍;申鋮皓;房曉宸;盧金昭
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: C07K14/81
• 分類號: C07K14/81;C12N15/15;A61K38/57;A61P31/04
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 李正

本發明提供了一種馬氏珠母貝Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制劑基因、編碼的蛋白質和應用，屬于蛋白用途技術領域，所述馬氏珠母貝Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制劑基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，編碼的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本發明提供的基因編碼的蛋白對大腸桿菌、銅綠假單胞菌、嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌和哈維氏弧菌具有抑制作用。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，尤其涉及一種馬氏珠母貝Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制劑基因、編碼的蛋白質和應用。

背景技術

近年來由于高密度養殖、養殖水域富營養化、生態環境惡化等原因使得貝類養殖品種頻發各種由細菌或病毒等引起的感染性疾病。而防治過程大量地使用抗生素等傳統藥物，破壞了水環境的微生態平衡，使某些病原體對藥物產生了耐藥性，無法有效地控制疾病的發生，導致馬氏珠母貝因病害發生大量死亡，對我國珍珠產業造成了巨大的經濟損失。因此，了解馬氏珠母貝免疫機制并在此基礎上提高馬氏珠母貝抗脅迫能力是目前亟需解決的問題?？咕氖秦愵惿锩庖邫C制中最重要的一個環節，也是貝類在對抗病原體入侵的最重要防線，了解珠母貝體內各種抗菌肽分子的組成及特點對于開發珠母貝抗菌肽來源的新型生物抗生素具有重要意義，但目前對馬氏珠母貝抗菌肽的報道甚少，數據庫中尚無馬氏珠母貝的抗菌肽序列報道。

海洋是世界上物種最為豐富的聚集地，從海洋無脊椎動物中探索出具有抗菌活性的物質，具有極大的潛力。為了解決抗生素濫用和耐藥性問題，從水產養殖動物自身出發，探究接近天然的生物抗生素，提高抗菌廣譜性和耐藥性。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種馬氏珠母貝Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制劑基因、編碼的蛋白質和應用，本發明提供的基因編碼的蛋白對大腸桿菌、銅綠假單胞菌、嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌和哈維氏弧菌具有抑制作用。

為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供了一種馬氏珠母貝Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制劑基因，所述馬氏珠母貝Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制劑基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

本發明還提供了上述技術方案所述的馬氏珠母貝Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制劑基因編碼的蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

本發明還提供了上述技術方案所述的蛋白在制備抑制微生物的藥物中的應用。

優選的，所述微生物包括革蘭氏陰性菌。

優選的，所述革蘭氏陰性菌包括大腸桿菌、銅綠假單胞菌、嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌和哈維氏弧菌。

本發明提供了一種馬氏珠母貝Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制劑基因，所述馬氏珠母貝Kunitz型絲氨酸蛋白酶抑制劑基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，編碼的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本發明提供的基因編碼的蛋白對大腸桿菌、銅綠假單胞菌、嗜水氣單胞菌、副溶血弧菌和哈維氏弧菌具有抑制作用。

附圖說明

圖1為pMD19-T Vector克隆位點示意圖；

圖2為馬氏珠母貝PmKuPI的跨膜結構域預測；

圖3為PmKuPI結構域預測；

圖4為PmKuPI同源性比對；

圖5為系統進化樹構建(Neighbor-joining法)；

圖6為PmKuPI基因在馬氏珠母貝各組織的表達分布，M：外套膜，B：血細胞，Gi：鰓，Go：性腺，A：閉殼肌，He：肝胰；

圖7為PmKuPI原核表達重組質粒驗證；