[發明專利]利用固定化酶制備他汀中間體的方法在審
| 申請號: | 202010588965.2 | 申請日: | 2020-06-24 |
| 公開(公告)號: | CN111647591A | 公開(公告)日: | 2020-09-11 |
| 發明(設計)人: | 陶榮盛;鄭云;朱傅赟;沈青;沈正權;孫梁棟;潘震華;原犇犇;胡海亮;劉萍 | 申請(專利權)人: | 湖州頤盛生物科技有限公司 |
| 主分類號: | C12N11/089 | 分類號: | C12N11/089;C12N11/08;C12P13/00;C12P7/62 |
| 代理公司: | 上海申浩律師事務所 31280 | 代理人: | 賈師英 |
| 地址: | 313000 浙江省*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 利用 固定 制備 中間體 方法 | ||
1.一種利用固定化酶制備他汀中間體的方法,包括如下步驟:
A.使用固定化載體Seplite LX-1000NH和LX-G20將羰基還原酶固定化,得到固定化酶;
B.使用步驟A中得到的固定化酶催化6-氰基-(5R)-羥基-3-羰基己酸叔丁酯進行還原反應得到他汀中間體6-氰基-(3R,5R)-二羥基己酸叔丁酯,或者催化(S)-6-氯-5-羥基-3-羰基己酸叔丁酯進行還原反應得到他汀中間體6-氯-(3R,5S)-二羥基己酸叔丁酯。
2.如權利要求1所述的方法,其特征在于,所述固定化載體是Seplite LX-1000NH。
3.如權利要求2所述的方法,其特征在于,所述羰基還原酶的氨基酸序列為SEQ ID NO:1。
4.如權利要求3所述的方法,其特征在于,所述SEQ ID NO:1由大腸桿菌表達得到。
5.如權利要求4所述的方法,其特征在于,所述步驟A為:將發酵后的大腸桿菌菌體離心,破壁,離心,取上清得粗酶液,在磷酸鹽緩沖液中與固定化載體混合、吸附,得到固定化酶。
6.如權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟B的反應體系pH為7.5-8.5。
7.如權利要求6所述的方法,其特征在于,反應體系中添加有異丙醇和輔酶NADP+。
8.如權利要求7所述的方法,其特征在于,反應溫度為30-45℃。
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