[發明專利]一種基于3D打印特形功能體的血液基因組DNA提取方法及其應用試劑盒

在審

• 申請號: 202010585509.2
• 申請日: 2020-06-23
• 公開（公告）號: CN111607635A
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 李佩佩;姜曉濱;李蒙航;袁志杰;范琦
• 申請（專利權）人: 大連理工大學
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 周媛媛;李馨

1.一種基于3D打印特形功能體的血液基因組DNA提取方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)用裂解液對待測血液樣本進行裂解處理；

(2)通過手持或機器持將3D打印特形功能體的核酸結合區伸入步驟(1)所得溶液中，進行核酸的結合；

(3)通過手持或機器持移動完成步驟(2)的3D打印特形功能體，將核酸結合區伸入清洗液中，進行核酸清洗；

(4)通過手持或機器持將完成步驟(3)的3D打印特形功能體取出，進行干燥；

(5)通過手持或機器持將完成步驟(4)的3D打印特形功能體的核酸結合區置入洗脫液中，進行洗脫，所得洗脫液即為血液基因組DNA；

所述待測血液樣本包括脫離人體或動物體的血液全血、去掉上清的血紅細胞、干血斑。

2.根據權利要求1所述的血液基因組DNA提取方法，其特征在于，所述3D打印特形功能體為以光敏樹脂或熱塑性塑料為原料，通過3D打印技術獲得的具有“傘”型結構的微元件，包括核酸結合區和手柄區。

3.根據權利要求2所述的血液基因組DNA提取方法，其特征在于，所述3D打印特形功能體含有1個或至少兩個核酸結合區，為至少兩個核酸結合區時，手柄區依靠連接區并排連接在一起；所述核酸結合區為圓錐體；所述手柄區為圓柱體或長方體，手柄區的一端與核酸結合區的錐底中心位置連接，構成“傘”型結構；所述核酸結合區表面為平整或具有不平整微觀結構，所述不平整微觀結構包括螺紋襯托結構、凹槽結構、多孔結構、凸起結構；所述不平整微觀結構可以是任意形狀、分布在核酸結合區外表面的任意部位；所述多孔結構可以是納米、微米尺寸，多孔結構的形狀可以是球體、方體或不規則形狀；所述核酸結合區負載或不負載顆粒材料，所述顆粒材料包括無機鹽顆粒和金屬顆粒材料，所述無機鹽顆粒包括二氧化硅、二氧化鈦、二氧化錳；所述核酸結合區有或者沒有官能團修飾，所述官能團包括羥基、羧基、氨基。

4.根據權利要求3所述的血液基因組DNA提取方法，其特征在于，所述核酸結合區、手柄區、連接區為一體制備或分體制備，當各部分分體制備時，通過粘合組裝。

5.根據權利要求1所述的血液基因組DNA提取方法，其特征在于，所述步驟(1)中裂解液包括：CTAB裂解液、NaHCO₃裂解液、Chelex裂解液、蛋白酶K裂解液或SDS裂解液。

6.根據權利要求5所述的血液基因組DNA提取方法，其特征在于，所述SDS裂解液包括如下組分：1～20％SDS，0-30μg/mL的蛋白酶K。

7.根據權利要求1所述的血液基因組DNA提取方法，其特征在于，所述裂解液中加入或不加入RNA消化酶；裂解處理的時間為1min-24h，溫度為0-100℃。

8.根據權利要求1所述的血液基因組DNA提取方法，其特征在于，所述步驟(2)中進行核酸的結合，加入或不加入輔助結合溶劑，所述輔助結合溶劑包括異丙醇、無水乙醇中的一種或兩者的混合溶液，輔助結合溶劑的體積為裂解液體積的0.6-0.8倍；結合時間為5s-5min。

9.根據權利要求1所述的血液基因組DNA提取方法，其特征在于，步驟(3)所述進行核酸清洗，次數為1-5次，清洗時間為每次2s-1min；所述清洗液包括70-80％的酒精；步驟(4)所述的干燥過程可在室溫或加熱下進行，干燥過程時間為1min-2h；步驟(5)所述洗脫液包括水、PBS、TE緩沖液和下游PCR反應液，洗脫時間為5s-5min。

10.一種基于3D打印特形功能體的血液基因組DNA提取方法的應用試劑盒，其特征在于，包含如下組分：

(1)3D打印特形功能體；

(2)裂解液；

(3)蛋白酶K；

(4)RNA消化酶；

(5)清洗液；

(6)洗脫液；

(7)固定架；

(8)操作說明書；

所述3D打印特形功能體為以光敏樹脂或熱塑性塑料為原料，通過3D打印技術獲得的由核酸結合區和手柄區組成的、具有“傘”型結構的微元件，并通過連接區將若干“傘”型結構的微元件并排連接；所述裂解液包括CTAB裂解液、NaHCO₃裂解液、Chelex裂解液、蛋白酶K裂解液或SDS裂解液中的一種；所述清洗液包括70-80％的酒精；所述洗脫液包括水、PBS、TE緩沖液和下游PCR反應液中的一種；所述固定架為可以固定、排布若干個3D打印特形功能體的結構。