[發明專利]一種百山祖冷杉高效嫁接的方法

有效

• 申請號: 202010585124.6
• 申請日: 2020-06-23
• 公開（公告）號: CN111670703B
• 公開（公告）日: 2022-04-26
• 發明（設計）人: 陳利萍;劉柯;袁璐;楊洋;吳友貴;于明堅;金孝鋒;帥輝;王挺進;陳小榮;劉勝龍;葉珍林;楊鍇斌
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A01G2/30
• 分類號: A01G2/30;A01G2/35;A01G24/28;A01G24/15;A01G24/22;A01H4/00;A01N37/10;A01N43/90;A01P21/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 邱啟旺

本發明公開了一種百山祖冷杉高效嫁接的方法，旨在解決百山祖冷杉對低海拔地區氣候條件適應性差的問題。本發明以百山祖冷杉試管苗為接穗，選取適應中低海拔地區生長的冷杉屬其他物種試管苗為砧木，在保留砧木頂端分生組織的基礎上，利用植物生長調節劑處理砧木與接穗接觸表面后，嫁接百山祖冷杉的接穗，經過嫁接部位愈合、煉苗、移栽馴化等階段獲得百山祖冷杉嫁接苗。本發明利用百山祖冷杉和同屬其他物種的無菌試管苗，短時間內獲得較多的試管嫁接苗，且嫁接部位愈合速度快，成活率高，能夠改善百山祖冷杉在自然條件下分布范圍狹窄的問題。該方法快速高效，對改良百山祖冷杉，提高百山祖冷杉環境適應性，擴大百山祖冷杉適生海拔范圍具有重要意義。

技術領域

本發明涉及一種百山祖冷杉高效嫁接的新方法，從而達到提高瀕危物種對低海拔地區氣候適應性的目的。

背景技術

百山祖冷杉(Abies Beshanzuensis M.H.Wu)是中國植物學者吳鳴翔于1976年發表的松科冷杉屬新種，是我國特有的古老孑遺植物。自然條件下，百山祖冷杉群體數量極少，1987年，被國際自然保護聯盟物種生存委員會列為全球最瀕危的12種植物之一。

第三世紀百山祖冷杉曾在蘇、浙、皖、閩等省廣泛分布，然而，在經歷了第四冰川時期和間冰期后，百山祖冷杉的生境發生了劇變，嚴重影響了百山祖冷杉的生長繁育，導致群體數量驟減，呈孤島狀分布。目前百山祖冷杉的野生植株僅存在于浙江省南部慶元縣百山祖的高海拔地區(海拔1750m)，在中低海拔地區未見自然分布，由此可見百山祖冷杉對不同氣候條件，尤其對不同海拔的自然條件適應性有限。同時，百山祖冷杉存在群體數量極少、種子敗育率高和自然更新困難的問題，導致百山祖冷杉處于極度瀕危的狀態。因此需要探索一種快速改善百山祖冷杉適應性的新方法，以達到更新復壯百山祖冷杉的目的。

試管嫁接，是指對生長在試管內或培養皿中的植物幼苗進行嫁接而獲得新植株的一種技術。和一般方法相比，試管嫁接技術具有許多獨特的優點，可顯著提高砧木與接穗之間的親和力，同時減少了季節、溫度、濕度、土壤等外部環境的限制。通過選取對不同海拔氣候適應能力更強的同屬近緣物種為砧木，保留砧木頂端分生組織的試管嫁接方法，有效地提高了百山祖冷杉嫁接的成活率，同時縮短了嫁接部位愈合的時間。因此，利用試管嫁接技術改良百山祖冷杉，可以獲得海拔適應范圍更廣的百山祖冷杉植株，有效地促進了百山祖冷杉的更新復壯，為擴大百山祖冷杉種群數量提供堅實的基礎。

發明內容

本發明的目的是提供一種百山祖冷杉高效嫁接的新方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：一種百山祖冷杉高效嫁接的方法，包括如下步驟：

(1)采摘百山祖冷杉與日本冷杉的球果，剝取其未成熟胚及胚乳進行培養，獲得無菌的試管苗；

(2)在超凈工作臺上，依次將步驟1得到的試管苗置于體視顯微鏡下，利用無菌手術刀和鑷子對其進行切割。然后，將其放置于含有濕潤濾紙的培養皿中備用；其中，日本冷杉的試管苗作為砧木，切割時保留頂端分生組織；百山祖冷杉的試管苗作為接穗。

(3)在無菌條件下，將準備好的砧木和接穗放入含有植物生長調節劑水溶液中進行浸泡，然后將砧木和接穗放置于體視顯微鏡下進行試管嫁接，并用硅膠嫁接管固定嫁接部位；

(4)嫁接完成后，將嫁接試管苗接種至培養基上進行弱光培養，砧木和接穗愈合后，將其移至正常光照條件下培養；

(5)嫁接苗培養30d后，將嫁接試管苗進行高光強煉苗，并打開瓶口，使其逐漸適應外界環境。3d后，洗去植株根部附著的培養基，將植株移栽至人工配制的混合培養基質中，澆水至基質濕潤，于人工氣候箱中培養。

進一步地，在所述步驟(1)中，所述百山祖冷杉和日本冷杉的球果采摘時間為8月中旬。

進一步地，在所述步驟(1)中，所述用于嫁接的無菌試管苗苗齡是10～15d。