[發(fā)明專利]基于3D打印特形功能體的貝類基因組DNA提取方法、試劑盒及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010584270.7
• 申請(qǐng)日: 2020-06-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111778236A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李佩佩;趙振軍;葉博;岳冬梅;宋倫;姜曉濱;袁志杰;李蒙航;范琦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/686
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責(zé)任公司 21212
• 代理人: 周媛媛;李馨

1.一種基于3D打印特形功能體的貝類基因組DNA提取方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)用裂解液對(duì)待測(cè)貝類樣本進(jìn)行裂解處理；

(2)手持或者機(jī)器持將3D打印特形功能體的核酸結(jié)合區(qū)伸入步驟(1)所得溶液中，進(jìn)行核酸的結(jié)合；

(3)手持或者機(jī)器持將完成步驟(2)的3D打印特形功能體的核酸結(jié)合區(qū)放入清洗液中，進(jìn)行清洗；

(4)將完成步驟(3)的3D打印特形功能體取出、進(jìn)行干燥；

(5)手持或者機(jī)器持將完成步驟(4)的3D打印特形功能體的核酸結(jié)合區(qū)置入洗脫液中，進(jìn)行洗脫，所得洗脫液即為基因組DNA；

所述待測(cè)貝類樣本包括整個(gè)貝體、貝體的任意部位的任意成分、貝類組織或各個(gè)器官。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貝類基因組DNA提取方法，其特征在于，步驟(1)中所述裂解液包括：CTAB裂解液、NaHCO₃裂解液、Chelex裂解液、蛋白酶K裂解液、SDS裂解液或Trizol裂解液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的貝類基因組DNA提取方法，其特征在于，所述SDS裂解液包括如下組分：1～10％SDS，0-30μg/mL的蛋白酶K。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貝類基因組DNA提取方法，其特征在于，所述裂解液中包括或不包括RNA消化酶；所述裂解過(guò)程的處理時(shí)間為1min-24h，處理溫度為0-100℃。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貝類基因組DNA提取方法，其特征在于，步驟(2)中所述的3D打印特形功能體為以光敏樹脂或熱塑性塑料為原料，通過(guò)3D打印技術(shù)獲得的具有“傘”型結(jié)構(gòu)的微元件，包括核酸結(jié)合區(qū)和手柄區(qū)；

所述核酸結(jié)合區(qū)為圓錐體，手柄區(qū)為圓柱體或長(zhǎng)方體，手柄區(qū)的一端與核酸結(jié)合區(qū)的錐底中心位置連接，構(gòu)成“傘”型結(jié)構(gòu)；所述3D打印特形功能體含有1個(gè)或至少兩個(gè)核酸結(jié)合區(qū)，為至少兩個(gè)核酸結(jié)合區(qū)時(shí)，手柄區(qū)依靠連接區(qū)并排連接在一起；所述核酸結(jié)合區(qū)表面為平整或不平整微觀結(jié)構(gòu)，所述不平整微觀結(jié)構(gòu)包括螺紋襯托結(jié)構(gòu)、凹槽結(jié)構(gòu)、多孔結(jié)構(gòu)、凸起結(jié)構(gòu)；所述多孔結(jié)構(gòu)包括納米、微米尺寸，多孔結(jié)構(gòu)的形狀包括球體、方體或不規(guī)則形狀；所述核酸結(jié)合區(qū)負(fù)載或不負(fù)載顆粒材料，所述顆粒材料包括無(wú)機(jī)鹽顆粒和金屬顆粒，所述無(wú)機(jī)鹽顆粒包括二氧化硅、二氧化鈦、二氧化錳；所述核酸結(jié)合區(qū)有或者沒(méi)有表面官能團(tuán)修飾，所述表面官能團(tuán)包括羥基、羧基、氨基。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的貝類基因組DNA提取方法，其特征在于，所述核酸結(jié)合區(qū)、手柄區(qū)、連接區(qū)為一體制備或分體制備；當(dāng)各部分分體制備時(shí)，通過(guò)粘合組裝。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貝類基因組DNA提取方法，其特征在于，步驟(2)所述進(jìn)行核酸的結(jié)合，加入或不加入輔助結(jié)合溶劑，所述輔助結(jié)合溶劑包括異丙醇、無(wú)水乙醇中的一種或兩者的混合溶液，輔助結(jié)合溶劑的體積為裂解液體積的0.6-0.8倍；結(jié)合時(shí)間為5s-5min；

步驟(3)所述的清洗為1-5次；清洗時(shí)間為每次2s-1min；所述清洗液包括70-80％的酒精；

步驟(4)所述干燥可在室溫或加熱下進(jìn)行，干燥時(shí)間為1min-2h。

步驟(5)所述的洗脫液包括水、PBS、TE緩沖液和下游PCR反應(yīng)液；洗脫時(shí)間為5s-5min。

8.基于3D打印特形功能體的貝類基因組DNA提取試劑盒，其特征在于，試劑盒包含3D打印特形功能體、裂解液、清洗液、洗脫液、蛋白酶K、RNA消化酶、固定架和使用說(shuō)明書，所述3D打印特形功能體為以光敏樹脂或熱塑性塑料為原料，通過(guò)3D打印技術(shù)獲得的由核酸結(jié)合區(qū)和手柄區(qū)組成的、具有“傘”型結(jié)構(gòu)的微元件，并通過(guò)連接區(qū)將若干“傘”型結(jié)構(gòu)的微元件并排連接；所述裂解液包括CTAB裂解液、NaHCO₃裂解液、Chelex裂解液、蛋白酶K裂解液或SDS裂解液中的一種；所述清洗液包括70-80％的酒精；所述洗脫液包括水、PBS、TE緩沖液和下游PCR反應(yīng)液中的一種；所述固定架為可以固定、排布若干個(gè)3D打印特形功能體的結(jié)構(gòu)。