[發明專利]一種酪酸梭菌凍干粉、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 202010583055.5
• 申請日: 2020-06-23
• 公開（公告）號: CN111647538A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 馬玉濤;李國強;崔寧;韓登蘭;耿宏偉;崔兆臣
• 申請（專利權）人: 科興生物制藥股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/145
• 代理公司: 上海微策知識產權代理事務所(普通合伙) 31333
• 代理人: 李萍

1.一種酪酸梭菌凍干粉，其特征在于，其包括酪酸梭菌和復合保護劑，按重量份計，所述復合保護劑包括15～35份脫脂奶粉、5～23份碳水化合物、1～5份抗壞血酸。

2.根據權利要求1所述酪酸梭菌凍干粉，其特征在于，所述碳水化合物選自蔗糖、麥芽糖、乳糖、麥芽三糖、海藻糖中一種或多種。

3.根據權利要求2所述酪酸梭菌凍干粉，其特征在于，所述碳水化合物包括蔗糖和海藻糖，其重量比為1：(0.3～7.5)。

4.根據權利要求1所述酪酸梭菌凍干粉，其特征在于，所述復合保護劑還包括2～10重量份菊粉。

5.根據權利要求1～4任一項所述酪酸梭菌凍干粉，其特征在于，所述酪酸梭菌凍干粉中酪酸梭菌的存活率大于79％，活菌含量大于8.6×10⁸cfu/g。

6.一種根據權利要求1～5任一項所述酪酸梭菌凍干粉的制備方法，其特征在于，其包括下面步驟：

(1)菌種培養：培養酪酸梭菌至對數生長期末期或穩定期初期，芽孢率大于80％，獲得酪酸梭菌發酵液；

(2)收集菌體：將酪酸梭菌發酵液沉淀，獲得濕菌泥；

(3)添加復合保護劑：按照濕菌泥：復合保護劑為(1～0.2)：(0.1～1)的重量比將濕菌泥和復合保護劑混合得到混合物；

(4)真空冷凍干燥：將混合物于25～37℃平衡20～60min，-45℃預凍6～12h，然后在3～8Pa下冷凍干燥16～28h，即得。

7.根據權利要求6所述酪酸梭菌凍干粉的制備方法，其特征在于，其包括下面步驟：

(1)菌種活化：在無菌室中，將低溫保存的酪酸梭菌菌種溶解在20～30mL無菌生理鹽水中，振蕩混勻后按照體積比為2％～6％的接種量接種于梭菌增菌液體培養基中，35～38℃條件下厭氧培養7～12h，再按照相同接種量、培養條件在梭菌增菌液體培養基中連續活化2代，獲得第3代液體活化培養物；

(2)擴大培養：將得到的第3代活化培養物進行一級種子培養和二級種子培養獲得二級種子液體培養物；

(3)菌種培養：將二級種子液體培養物按照體積比為2％～6％的接種量接種于液體發酵培養基中，35～38℃厭氧培養16～28h后，獲得生長至對數生長期末期或穩定期初期且芽孢率大于80％的酪酸梭菌發酵液；

(4)收集菌體：將酪酸梭菌發酵液沉淀，獲得濕菌泥；

(5)添加復合保護劑：按照濕菌泥：復合保護劑為(1～0.2)：(0.1～1)的重量比將濕菌泥和復合保護劑混合得到混合物；

(6)真空冷凍干燥：將混合物于25～37℃平衡20～60min，-45℃預凍6～12h，然后在3～8Pa下冷凍干燥16～28h，即得。

8.根據權利要求7所述酪酸梭菌凍干粉的制備方法，其特征在于，所述液體發酵培養基的成分包括：8～15g胰蛋白胨、4～6g酵母浸粉、8～12g牛肉膏、1～5g硫酸銨、5～15g葡萄糖、1～5g可溶性淀粉、5～15g消化血清粉、1～5g醋酸鈉、1～5g磷酸氫二鉀、1～5g磷酸二氫鉀、0.01～0.05g硫酸鎂、1～5g碳酸鈣、0.2～0.8g L-半胱氨酸，蒸餾水1000mL。

9.根據權利要求8所述酪酸梭菌凍干粉的制備方法，其特征在于，所述液體發酵培養基的成分還包括抗凍因子，所述抗凍因子選自甘露醇、谷氨酸鈉、氯化鈉中一種或多種。

10.一種根據權利要求1～5任一項所述酪酸梭菌凍干粉在保健食品、醫療生物制劑中的應用。