[發(fā)明專利]一種人脂肪間充質干細胞超低溫凍存后的復蘇方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010580894.1
• 申請日: 2020-06-23
• 公開（公告）號: CN111849880B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發(fā)明（設計）人: 楊桂花;趙進軍;趙宇飛
• 申請（專利權）人: 和攜科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 趙萬凱

1.一種人脂肪間充質干細胞超低溫凍存后的復蘇方法，其特征在于：其包含如下步驟：

S1：將從液氮罐中放有種子干細胞的凍存管快速放入37℃水浴鍋中，迅速搖動凍存管使其中凍存液快速融化，得到解凍凍存液；

S2：將解凍凍存液移到裝有培養(yǎng)基的離心管中，離心后棄去離心管中的上清液，并震散細胞沉淀，得到離心細胞沉淀，所述培養(yǎng)基包括以下質量份的原料：基礎培養(yǎng)基100份、芍藥苷0.24-0.3份；

S3：向盛有離心細胞沉淀的離心管加入溶液A混勻，得到細胞懸液，所述溶液A用量為5~6mL/支離心管，所述溶液A包括以下重量份數(shù)的原料：基礎培養(yǎng)基95-97份、血清替代物3-5份、地黃低聚糖0.3-0.32份；

S4：將溶液A按照25mL/瓶量加入細胞培養(yǎng)瓶中，吸取步驟S3中的細胞懸液3~5mL，接種至細胞培養(yǎng)瓶中，細胞接種量為8×10⁵~2×10⁶/瓶；

S5：將S4的細胞培養(yǎng)瓶進行繼續(xù)培養(yǎng)。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種人脂肪間充質干細胞超低溫凍存后的復蘇方法，其特征在于：S2中在解凍凍存液移到裝有培養(yǎng)基的離心管后，向凍存管中加入1~2mL培養(yǎng)基，清洗凍存管管壁并將沖洗液倒入S2同一離心管中。

3.根據(jù)權利要求2所述的一種人脂肪間充質干細胞超低溫凍存后的復蘇方法，其特征在于：S2中離心步驟包括：

T1：將離心管放入離心機，300g離心5min；

T2：吸棄上清液，輕輕震散細胞沉淀；

T3：再向離心管中加入培養(yǎng)基，定容至10mL，顛倒混勻；

T4：再次放入離心機，300g離心5min。

4.根據(jù)權利要求3所述的一種人脂肪間充質干細胞超低溫凍存后的復蘇方法，其特征在于：S5中細胞培養(yǎng)瓶培養(yǎng)瓶放入CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時。

5.根據(jù)權利要求4所述的一種人脂肪間充質干細胞超低溫凍存后的復蘇方法，其特征在于：所述溶液中血清替代物的含量為4wt%。

6.根據(jù)權利要求5所述的一種人脂肪間充質干細胞超低溫凍存后的復蘇方法，其特征在于：S5使用的細胞培養(yǎng)瓶為T-175培養(yǎng)瓶，細胞接種量為1.0×10⁶／瓶。