[發(fā)明專利]一種鑒定或輔助鑒定多花黃精的引物對、方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010580857.0
• 申請日: 2020-06-23
• 公開（公告）號(hào): CN111676310A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 俞年軍;祝明珠;韓榮春;周安;陳衛(wèi)東;邢麗花;彭代銀;徐君;程鶴;吳振東
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 合肥昊晟德專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34153
• 代理人: 王林

本發(fā)明公開了一種鑒定或輔助鑒定多花黃精的引物對、方法及應(yīng)用，本發(fā)明的引物對由引物PCY 1?F和引物PCY 1?R組成。使用如所述的引物對待測樣本的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；如果擴(kuò)增產(chǎn)物中含有1500bp左右的DNA片段，待測樣本為或候選為多花黃精；如果擴(kuò)增產(chǎn)物中不含有1500bp左右的DNA片段，待測樣本為非多花黃精。本發(fā)明是通過測序和序列分析技術(shù)，對包含多花黃精所有物種在內(nèi)的3種藥典用黃精樣品進(jìn)行測序和序列分析，發(fā)現(xiàn)一個(gè)只存在于多花黃精的SNP分子標(biāo)記，并建立了該SNP標(biāo)記的特異性檢測方法，本發(fā)明建立的方法具有極高的特異性，可作為多花黃精特異性分子標(biāo)記。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種中藥特異性分子標(biāo)記技術(shù)，尤其涉及的是一種鑒定或輔助鑒定多花黃精的引物對、方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

多花黃精(PolygonatumcyrtonemaHua)為《中國藥典》2020年版收錄的黃精藥材的原植物之一，具補(bǔ)氣、養(yǎng)陰、健脾、潤肺、益腎等功效，用于脾胃氣虛，體倦乏力，精血不足等癥。本草《名醫(yī)別錄》始載黃精，有“味甘，平，無毒。主補(bǔ)中益氣，除風(fēng)濕，安五臟。久服輕身、延年、不饑。”可知，黃精一直作為補(bǔ)益的大宗藥材，其藥用價(jià)值巨大，且亦可作藥膳食用。多花黃精主要分布在華東、中南、四川、貴州、湖南、湖北、河南、安徽等地。

位點(diǎn)特異性PCR鑒別技術(shù)已成功應(yīng)用于多花黃精及其偽品的鑒別，但均未將藥典收錄黃精藥材的三種黃精屬來源植物進(jìn)行有效鑒別，且大多通過一段基因組序列尋找SNP位點(diǎn)并設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)而鑒別。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于：如何將藥典黃精規(guī)定的三個(gè)種質(zhì)中的多花黃精快速鑒別，提供一種鑒定或輔助鑒定多花黃精的引物對、方法及應(yīng)用。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題的，本發(fā)明的一種鑒定或輔助鑒定多花黃精的引物對，所述引物對由引物PCY 1-F和引物PCY 1-R組成，所述引物PCY 1-F為如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表中序列2所示的單鏈DNA分子；

(a2)將序列2經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列2具有相同功能的DNA分子；

所述引物PCY 1-R為如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表中序列3所示的單鏈DNA分子；

(a4)將序列3經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且與序列3具有相同功能的DNA分子。

如所述的引物對在鑒定或輔助鑒定多花黃精中的應(yīng)用。

所述藥用多花黃精葉綠體基因組為序列表中序列1所示的DNA分子。

一種鑒定或輔助鑒定多花黃精的方法，包括以下步驟：

(1)使用如權(quán)利要求1所述的引物對待測樣本的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

(2)如果擴(kuò)增產(chǎn)物中含有1500bp左右的DNA片段，待測樣本為或候選為多花黃精；如果擴(kuò)增產(chǎn)物中不含有1500bp左右的DNA片段，待測樣本為非多花黃精。

待測樣本的基因組DNA中特異SNP位點(diǎn)的基因型為CT基因型，待測樣本為多花黃精；

待測樣本的基因組DNA中特異SNP位點(diǎn)的基因型為非CT基因型，待測樣本為非多花黃精。

所述特異SNP位點(diǎn)為序列1中自5'末端第153809位核苷酸位點(diǎn)。

所述1500bp左右的DNA片段為1507bp。

所述待測樣本為多花黃精、黃精、滇黃精。

一種鑒定或輔助鑒定多花黃精的試劑盒，包括如所述的引物對。