[發明專利]一種以柑橘皮為原料提高木糖醇產量的發酵方法

在審

• 申請號: 202010579607.5
• 申請日: 2020-06-23
• 公開（公告）號: CN111662935A
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 陳雪松;楊勝利
• 申請（專利權）人: 浙江樹人學院(浙江樹人大學)
• 主分類號: C12P7/18
• 分類號: C12P7/18
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230
• 代理人: 陳炳萍

1.一種以柑橘皮為原料提高木糖醇產量的發酵方法，其特征在于，所述以柑橘皮為原料提高木糖醇產量的發酵方法包括以下步驟：

步驟一，柑橘皮水解液的制備：選材，柑橘皮半纖維素水解，濃縮，中和；

步驟二，發酵條件的優化：對裝液量、接種量、水解液的pH、發酵溫度和轉速進行單因素實驗，依次求得最優培養條件；

步驟三，測定方法：木糖濃度測定，木糖醇含量測定，轉化率計算。

2.如權利要求1所述的以柑橘皮為原料提高木糖醇產量的發酵方法，其特征在于，進一步，步驟一中，所述柑橘皮水解液的制備方法包括：

(1)柑橘皮：選自溫州蜜柑皮，將蜜柑皮烘干后，用電動粉碎器粉碎，粉碎粒度100目，半纖維素質量分數為6.9％；

(2)柑橘皮半纖維素水解：柑橘皮粉末以1:7(質量：體積)的固液比與質量濃度1.0％硫酸混合，121℃下水解1小時；

(3)濃縮：水解液離心濾去殘渣后，50℃真空濃縮至總還原糖為20％；

(4)中和：水解液用NaOH中和至pH 10.0，4000r/min離心20分鐘去除沉淀；上清液用濃硫酸回調至pH 5.5，冷藏備用。

3.如權利要求1所述的以柑橘皮為原料提高木糖醇產量的發酵方法，其特征在于，步驟二中，所述發酵實驗每個變量做三個平行樣，以木糖轉化率為指標，確定最優條件；轉速140r/min，裝液量為60mL/250mL，溫度30℃，接種量為4％，起始pH5.5，最后木糖轉化率達到64.4％，較未優化時的木糖轉化率提高18.1％。

4.如權利要求1所述的以柑橘皮為原料提高木糖醇產量的發酵方法，其特征在于，步驟三中，所述木糖濃度的測定方法為：

(I)取待測樣品10mL，3000r/min離心10min，將上清液適當稀釋；

(II)將1mL稀釋的上清液加入25mL大試管中，加入3mL的DNS試劑，充分混勻后在沸水浴中反應5min，冷卻，定容至25mL；

(III)在540nm波長處測量吸光度值，根據標準曲線回歸方程計算出樣品糖濃度。

5.如權利要求1所述的以柑橘皮為原料提高木糖醇產量的發酵方法，其特征在于，步驟三中，所述木糖醇含量的測定方法為：

采用紫外分光光度計法測定木糖醇的含量，具體包括：

1)取適量發酵液，4500r/min離心15min，將上清液適當稀釋；

2)取1mL稀釋液于小試管中，加入1mL試劑a，混勻后在室溫下反應10min；

3)再分別加入2mL試劑b和4mL的NaSH試劑，混合均勻后在53℃水浴中保溫15min，冷卻后于412nm處測定吸光度值。

6.如權利要求5所述的以柑橘皮為原料提高木糖醇產量的發酵方法，其特征在于，所述試劑的配置方法為：

①試劑a：將0.320g高碘酸鉀溶于100mL 1％的鹽酸中；

②試劑b：配置鼠李糖1.11g/L；

③NaSH試劑(需現配現用)：在100mL 150g/L的乙酸銨中，分別加入0.2mL的乙酸及乙酰丙酮。

7.如權利要求1所述的以柑橘皮為原料提高木糖醇產量的發酵方法，其特征在于，步驟三中，所述轉化率的計算方法為：

8.如權利要求1所述的以柑橘皮為原料提高木糖醇產量的發酵方法，其特征在于，所述以柑橘皮為原料提高木糖醇產量的發酵方法中，所述菌種來自實驗室保藏的Y-3號菌株；

活化培養基(g/L)：酵母膏5，磷酸二氫鉀2，D-木糖20，二水氯化鈣0.1，硫酸銨5，七水硫酸鎂0.2，瓊脂20；

種子保藏培養基(g/L)：酵母膏5，磷酸二氫鉀2，D-木糖20，二水氯化鈣0.1，硫酸銨5，七水硫酸鎂0.2，瓊脂20；

發酵培養基(g/L)：柑橘皮水解液(木糖含量20)，酵母粉10，蛋白胨10；

滅菌條件：木糖與其他營養成分分開滅菌，條件為121℃，20min。