[發(fā)明專利]一種管棲生物精細(xì)運(yùn)動的可視化培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010574850.8
• 申請日: 2020-06-22
• 公開（公告）號: CN111869602B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫瑜;吳岸譯;伍佩怡;吳照坤;吳嘉寧;吳志
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00;A01K63/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 張金福

本發(fā)明提出一種管棲生物精細(xì)運(yùn)動的可視化培養(yǎng)方法，包括以下步驟：選擇管棲生物樣本以及選擇用于培養(yǎng)樣本的玻璃管；將樣本的生物管的底部剪開形成開口，從生物管頂部至底部方向緩慢擠壓管體，使樣本中的生物體與生物管脫離，清洗生物體表面；將生物體轉(zhuǎn)移至玻璃管；將生物體尾部伸出玻璃管的一端設(shè)置，對生物體尾部進(jìn)行培養(yǎng)，生物體尾部分泌粘液后固化成封閉管口；將生物體放置在無環(huán)境壓力的生態(tài)缸中培養(yǎng)3天以上，得到中段為透明玻璃管，首尾兩端為膜質(zhì)生物管的三段式結(jié)構(gòu)的管棲生物精細(xì)運(yùn)動觀察樣本，可應(yīng)用于管棲生物精細(xì)運(yùn)動觀察。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物觀察技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種管棲生物精細(xì)運(yùn)動的可視化培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

水生管棲動物靠快速縮入掩埋在砂石中的空心管中來確保生存，這種可完全容納生物體的空心管來源于生物體自身分泌物的固化，包括鞘質(zhì)軟管或鈣質(zhì)硬管。在解除威脅后，管棲動物通常會緩慢地把身體的一部分伸出管外，用于呼吸或者進(jìn)食。目前對采集的管棲動物的處理方法主要通過刺激生物體至無生物反應(yīng)后，存儲在70％的酒精新液中保存[1](李福新.膠州灣幾種管棲動物的采集方法[J].動物學(xué)雜志,1963(02):46-49.)。

研究者們試圖了解生物體在管內(nèi)的精細(xì)化運(yùn)動，然而，上述管棲動物的處理方法僅適用于標(biāo)本保存，無法實(shí)現(xiàn)管棲生物的生物反應(yīng)及其精細(xì)運(yùn)動的觀察，而管棲生物生存的不透明管極大的限制了觀察條件。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為克服上述現(xiàn)有技術(shù)所述的管棲生物生存的不透明管影響對管棲生物精細(xì)運(yùn)動的觀察的缺陷，提供一種管棲生物精細(xì)運(yùn)動的可視化培養(yǎng)方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種管棲生物精細(xì)運(yùn)動的可視化培養(yǎng)方法，包括以下步驟：

S1：前期準(zhǔn)備：選擇管棲生物樣本以及選擇用于培養(yǎng)樣本的玻璃管；

S2：壓迫離管：將樣本的生物管的底部剪開形成開口，從生物管頂部至底部方向緩慢擠壓管體，使生物體與生物管脫離，清洗生物體表面；

S3：誘導(dǎo)換管：將生物體轉(zhuǎn)移至玻璃管；

S4：管底培養(yǎng)：將生物體尾部伸出玻璃管的一端設(shè)置，對生物體尾部進(jìn)行培養(yǎng)，生物體尾部分泌粘液結(jié)合沙石后固化成封閉管口；

S5：靜置培養(yǎng)：將生物體放置在無環(huán)境壓力的生態(tài)缸中培養(yǎng)3天以上，得到中段為透明玻璃管，首尾兩端為膜質(zhì)生物管的三段式結(jié)構(gòu)的管棲生物精細(xì)運(yùn)動觀察樣本。

本技術(shù)方案中，完成換管及培養(yǎng)后的生物體呈三段式結(jié)構(gòu)，其下端尾部伸出玻璃管的一端設(shè)置，且尾部分泌粘液結(jié)合沙石后固化成封閉且不透明的膜質(zhì)生物管，其上端分泌出一小段不透明的膜質(zhì)生物管，其中段為人工選擇的玻璃管，生物體分泌的粘液貼合玻璃管的管壁后固化，與玻璃管形成一體，呈光滑透明狀，可用于清晰觀察樣本管棲生物的精細(xì)運(yùn)動。

優(yōu)選地，S1步驟中，選擇用于培養(yǎng)管棲生物樣本的玻璃管的直徑等于或小于管棲生物樣本的生物管的直徑。

優(yōu)選地，S1步驟中，用于培養(yǎng)管棲生物樣本的玻璃管選擇使用薄壁玻璃管。

優(yōu)選地，S3步驟中，采用兩相界面誘導(dǎo)法進(jìn)行誘導(dǎo)入管。

優(yōu)選地，S3步驟中，其具體步驟如下：

S31：將玻璃管垂直置入由純凈人工海水制成的水相中，管口位置高于水平面且處于氣相中；

S32：將生物體的尾部伸入玻璃管，調(diào)整管口高度，使生物體的尾部接觸水相、氣相轉(zhuǎn)換界面，同時確保生物體的身體只處于氣相中，保持上述狀態(tài)一定時間，生物體沿著玻璃管向水相移動至生物體完全進(jìn)入下方水相中；

S33：將玻璃管旋轉(zhuǎn)90°并保持?jǐn)?shù)秒，排除生物體尾部帶入的空氣。