[發明專利]一種呼吸道腺病毒的PCR熒光檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202010571644.1
• 申請日: 2020-06-22
• 公開（公告）號: CN111549184B
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 馬東禮;邢志浩;姜含芳;劉孝榮;鄧栩文
• 申請（專利權）人: 深圳市兒童醫院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 李興林

1.一種呼吸道腺病毒的PCR熒光檢測試劑盒，包括特異性引物和探針以及PCR反應試劑，所述特異性引物和探針是由人類腺病毒1-7型別的六鄰體蛋白基因的共同序列、人GADPH作為內參片段的特異性引物和探針組成，其特征在于，所述特異性引物和探針序列如下：

3,4,7型六鄰體蛋白基因目的片段的上游引物SEQ ID NO. 1：

5’- AGTCTTCGACGTGGTCAGAG -3’ ；

3,4,7型六鄰體蛋白基因目的片段的下游引物SEQ ID NO. 2：

5’- AGGTAGACGGCCTCGATGA -3’ ；

3,4,7型六鄰體蛋白基因目的片段的探針SEQ ID NO.3：

5’-FAM- TGCACCAGCCMCACCGCGG - TAMRA-3’ ；

1,2,5,6型六鄰體蛋白基因目的片段的上游引物SEQ ID NO. 4：

5’- CCGAGACGTACTTCAGCCT -3’ ；

1,2,5,6型六鄰體蛋白基因目的片段的下游引物SEQ ID NO. 5：

5’- GACCGGTCTGTGGTCACG -3’ ；

1,2,5,6型六鄰體蛋白基因目的片段的探針SEQ ID NO.6：

5’-FAM- CACGGTGGCGCCTACGCACG - TAMRA-3’；

內參片段人GADPH的上游引物SEQ ID NO. 7：5’- CAAGGGCATCCTGGGCTA -3’ ；

內參片段人GADPH的下游引物SEQ ID NO. 8：5’- GGTGTCGCTGTTGAAGTCAG -3’ ；

內參片段人GADPH的探針SEQ ID NO. 9：

5’-HEX- CACTGAGCACCAGGTGGTCTCCT -TAMRA-3’。

2.如權利要求1所述的呼吸道腺病毒的PCR熒光檢測試劑盒，其特征在于，PCR反應試劑12.5mM Tris-HCl，pH9.0、50mM KCl、0.13% Triton?X-100、3.13mM MgCl₂、0.45mM dATP、0.45mM dGTP、0.45mM dCTP、0.79mM dUTP與三對引物SEQ ID NO. 1和2、4和5、7和8，三個探針SEQ ID NO. 3、6、9共同組成PCR反應液A，其中引物濃度都為0.5μM，探針濃度都為0.15μM；PCR反應試劑20mM Tris-HCl、100mM KCl、 0.1mM EDTA、1 mM DTT、50% Glycerine、0.5%Tween?20、1-3U/μL 熱啟動酶、0.1-0.3U/μL UNG酶共同組成PCR反應液B。

3.如權利要求1或2所述的呼吸道腺病毒的PCR熒光檢測試劑盒，其特征在于，還包括陰性質控品和陽性質控品。

4.如權利要求3所述的呼吸道腺病毒的PCR熒光檢測試劑盒，其特征在于，所述陰性質控品為生理鹽水。

5.如權利要求3所述的呼吸道腺病毒的PCR熒光檢測試劑盒，其特征在于，所述陽性質控品為克隆有呼吸道腺病毒基因的陽性質粒。