[發明專利]一種重組豬IL-29融合蛋白及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202010570157.3
• 申請日: 2020-06-21
• 公開（公告）號: CN111848814B
• 公開（公告）日: 2022-12-06
• 發明（設計）人: 羅昊澍;師磊;鐘小榮;于金庫;韓國;熊劍勝
• 申請（專利權）人: 北京偉杰信生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K38/20;A61K47/64;A61K47/68;A61P31/12;A61P31/22;A61P31/20;A61P31/14
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 王崇

本發明公開了一種重組豬IL?29融合蛋白及其制備方法與應用，所述融合蛋白由豬IL?29直接或間接通過連接元件與免疫球蛋白Fc片段或豬血清白蛋白（PSA）連接而成。所述豬IL?29融合蛋白可基于基因工程技術，利用哺乳動物細胞表達系統制備得到。本發明提供的重組豬IL?29融合蛋白與天然豬IL?29相比，半衰期更長，抗病毒活性更高，可用于制備預防和治療豬病毒性疾病的藥物。

技術領域

本發明涉及生物醫藥和動物病毒性疾病的防控技術領域，具體地說，涉及一種重組豬IL-29融合蛋白及其制備方法與應用。

背景技術

白介素29（IL-29）是2003年首次被報道的一種具有抗病毒活性的細胞因子，在氨基酸序列上與IL-10細胞因子家族高度相似；因具有干擾素類的抗病毒活性，故也屬于Ⅲ型干擾素或IFN-λ家族，也稱為IFN-λ1。

IL-29，與IFN-α/β（Ⅰ型干擾素）類似，通過與相應的受體結合，激活JAK-STAT信號通路，誘導下游干擾素刺激基因(ISGs)的轉錄，從而刺激與抗病毒應答相關的蛋白表達，包括MxA、OASL和PKR等抗病毒蛋白。MxA是抗粘病毒蛋白家族成員，能夠阻礙病毒核酸進入胞內。OASL是2’-5’寡聚腺苷酸合成酶家族成員，可以抑制病毒蛋白合成及病毒感染。PKR是雙鏈RNA依賴性蛋白激酶，可引起細胞凋亡進而阻礙病毒的復制。體外研究顯示人IL-29可以降低，包括巨細胞病毒（CMV）、乙型肝炎病毒（HBV）、腦心肌炎病毒（EMCV）、水泡性口炎病毒（VSV）在內的，病毒的復制和誘導的細胞病變效應。ZymoGenetics Inc.公司研制的聚乙二醇化的IFN-λ1(PEG-IL-29)是治療丙型肝炎的一種干擾素新藥，1期臨床結果顯示對HCV（丙型肝炎病毒）患者單次注射PEG--IL-29 (2周1次, 1.5 μg/kg和3 μg/kg)或與Ribavirin聯合使用(PEG-IL-29 每周1次，0.5、0.75和2.25 μg/kg)，均表現出明顯的抗病毒效果，并且人體對該藥有良好的安全性和耐受性，無明顯的臨床不良反應。

雖然IL-29與IFN-α/β具有相似的抗病毒活性，但由于IFN-α/β受體廣泛分布于各種類型的細胞上，IFN-α/β與受體結合除了抗病毒外，還具有免疫調節、免疫抑制和抗細胞增殖的作用，因此，臨床使用具有非常明顯的副作用，包括流感樣綜合征、紅細胞和白細胞減少、骨髓細胞減少以及精神異常（抑郁、妄想、焦慮等）等。IL-29的受體之一—IL-28R1僅特異性表達于特定組織，如角質形成細胞、支氣管上皮細胞和肝細胞，受體的特異性決定細胞與IL-29結合的特異性，因此IL-29的臨床副作用明顯低于IFN-α/β。

在現代規模化、集約化的養豬廠中，病毒性傳染病的爆發，如藍耳病、豬流行性腹瀉、非洲豬瘟等，給豬場造成了重大的經濟損失。豬IFN-α是已有的獸用干擾素，但是用于治療病毒傳染病時，因免疫抑制，引起豬發燒、體重降低等副作用，影響豬的能量轉換因而限制使用，故常用于疫苗的免疫增強。研究表明，豬IL-29可有效抑制豬繁殖和呼吸障礙綜合征病毒（PRRSV）、水皰性口炎病毒（VSV）、偽狂犬病毒（PRV）、豬瘟病毒（CSFV）和豬流行性腹瀉病毒（PEDV）等病毒復制。并且在回腸類器官上，IL-29比IFN-α更有效的誘導ISGs表達和抑制 PEDV感染。此外，豬IL-29可以用于豬病毒性傳染病的治療，不會影響豬的飲食、能量轉換等，副作用明顯低于豬IFN-α。

豬天然干擾素類細胞因子在體內半衰期短，一般為2~4個小時，用于豬的抗病毒防治需要每天注射1~2次。此外商品化的豬IFN-α是利用雞新城病毒（NDV）誘導豬白細胞生產的，產量不足，質量參差不齊。用大腸桿菌系統生產干擾素蛋白已獲成功，但細菌屬于原核系統，不能正確加工折疊異源蛋白，且常以包涵體形式出現，增加了操作的難度。

鑒于目前豬養殖中缺乏長效、安全的抗病毒干擾素類產品，本專利著眼于使用基因重組技術和哺乳動物蛋白表達技術，開發長效的豬IL-29融合蛋白，用于豬病毒性疾病的預防和治療。

發明內容

本發明的目的是提供一種新型的重組豬IL-29融合蛋白及其制備方法與應用。