[發明專利]一種同時檢測煙葉、煙絲中揮發及半揮發酸、醇、酚的GC-MS-MS方法

有效

• 申請號: 202010569427.9
• 申請日: 2020-06-20
• 公開（公告）號: CN111679008B
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 王冰;秦亞瓊;崔華鵬;王曉瑜;趙俊偉;蔡君蘭;余晶晶;謝復煒;劉紹鋒;劉惠民
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 鄭州中民專利代理有限公司 41110
• 代理人: 黃宇亭

1.一種同時檢測煙葉、煙絲中揮發及半揮發酸、醇、酚的GC-MS/MS方法，其特征在于：煙葉晾干粉碎經酸性緩沖液泡發并用提取溶劑渦旋提取，提取液經DMF稀釋后加入混合吸附劑進行凈化，離心后取上清液，過有機相濾膜，取濾液，加入硅烷化試劑進行衍生，最后采用GC-MS/MS進行分析，具體步驟如下：

(1)煙葉的粉碎：將烤煙煙葉晾干，粉碎過篩至40-60目，室溫保存；

(2)煙葉樣本pH值調整：將60g含兩個結晶水的磷酸二氫鈉加入90mL去離子水中，然后滴加9.5g磷酸，搖勻待用；稱取2g煙粉，加入3mL配制好的酸性緩沖溶液，用細玻璃棒攪拌均勻，泡發30min；

(3) 樣品萃取：加入10mL提取溶劑及50μL內標工作液，以2500r/min渦旋1～5min，5000～8000r/min離心3～5min，所述內標工作液為反二己烯酸的二氯甲烷溶液，所述提取溶劑為二氯甲烷；

(4) 樣品凈化：取500μL有機相溶液于2mL離心管中，加入500μLDMF，搖勻，然后加入5～10mg吸附劑，立即渦旋離心以2500r/min渦旋1～5min，5000～8000r/min離心3～5min；上清液經0 .22μm有機相濾膜；吸附劑包括C18和GCB，粒度40~60μm，質量比1:1；

(5) 樣品衍生：取500μL過濾液，于1ml衍生瓶中，加入衍生化試BSTFA20μL，水浴60℃，衍生40min；

(6) 樣品分析：將待測液用GC-MS/MS分析，采用標準工作溶液制作標準曲線，用標準曲線定量；

GC-MS/MS分析條件如下：

色譜柱：彈性石英毛細管色譜柱，固定相為5％苯基-甲基聚硅氧烷，規格60m×0.25mm×0 .25μm，進樣口端串聯預柱，規格1m×0.25mm×0.25μm；

進樣口溫度：280℃；

進樣量：0 .8～1 .0μL；

進樣方式：分流進樣，分流比：10:1；

載氣：氦氣，恒流模式，流速1.0mL/min；

程序升溫：初溫40℃，然后以4℃/min的升溫速度升到280℃，再以10℃/min的升溫速率升至290℃，保持20min；

電離模式：電子轟擊電離，電離能70eV；

燈絲電流：35μA；

離子源溫度：280℃；四級桿溫度：150℃；傳輸線溫度：280℃；

Q2碰撞氣：氮氣，流量1.5mL/min；淬滅氣：氦氣，流量2.25mL/min；掃描方式：多反應監測(MRM)模式。

2.根據權利要求1所述的同時檢測煙葉、煙絲中揮發及半揮發酸、醇、酚的GC-MS/MS方法，其特征在于：步驟（2）中的pH值調整為3。

3.根據權利要求1所述的同時檢測煙葉、煙絲中揮發及半揮發酸、醇、酚的GC-MS/MS方法，其特征在于：所述內標工作液反二己烯酸的二氯甲烷溶液的濃度為100μg/mL。

4.根據權利要求1所述的同時檢測煙葉、煙絲中揮發及半揮發酸、醇、酚的GC-MS/MS方法，其特征在于：所述MRM參數包括保留時間的確定，母離子、子離子和碰撞能量的優化，具體為：首先將各化合物進行全掃描(Full Scan)，確定保留時間，并篩選2～3個質荷比及豐度較大的離子作為備選母離子；再將上述各母離子在不同的碰撞能量下包括5、10、15、20、25、30eV進行產物離子掃描(Product Ion Scan)，并篩選2個質荷比及豐度較大的離子作為子離子，每個化合物篩選出2～3對離子對及相應的最優碰撞能量；最后，用MRM模式對標準溶液、基質提取液、添加標準品的基質提取液進行分析，選擇無基質干擾、靈敏度高的兩對離子對分別作為定量及定性離子對。

5.根據權利要求1所述的同時檢測煙葉、煙絲中揮發及半揮發酸、醇、酚的GC-MS/MS方法，其特征在于：所述同時檢測煙葉、煙絲中揮發及半揮發酸、醇、酚的數量共118種。