[發明專利]一種用于檢測牛輪狀病毒的試劑盒及引物和探針

有效

• 申請號: 202010568416.9
• 申請日: 2020-06-19
• 公開（公告）號: CN111719020B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 周偉光;麗平;張志丹;希尼尼根;徐曉靜;彭雪松
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京和信華成知識產權代理事務所(普通合伙) 11390
• 代理人: 張永輝

本發明涉及病毒檢測領域，具體講，涉及一種用于檢測牛輪狀病毒的試劑盒及引物和探針。本發明提出一種用于檢測牛輪狀病毒的試劑盒，試劑盒中含有核酸擴增試劑，核酸擴增試劑中含有用于檢測牛輪狀病毒的引物和探針，引物包括由SEQ ID NO:1所示的上游引物、由SEQ ID NO:2所示的下游引物；探針包括由SEQ ID NO:3所示的探針。本發明的試劑盒具有高敏感性、高特異性的技術優勢。

技術領域

本發明涉及病毒檢測領域，具體講，涉及一種用于檢測牛輪狀病毒的試劑盒及引物和探針。

背景技術

輪狀病毒(Rotavirus，RV)是造成兒童和幼畜腹瀉的主要病原之一，對自然界中各種哺乳動物和鳥類都會造成很大影響。牛輪狀病毒(Bovine rotavirus，BRV)又稱犢牛腹瀉病毒(Calf diarrhea virus)，屬于呼腸孤病毒科(Reoviridea)輪狀病毒屬(Rotavirus)。牛輪狀病毒主要感染1月齡以內的犢牛，其中1周齡以內犢牛最為易感，主要癥狀包括食欲廢絕、精神萎頓、水樣腹瀉、甚至死亡，其嚴重程度可以分為無癥狀感染、溫和的自限性腹瀉及嚴重脫水和電解質失衡的重度腹瀉，犢牛感染該病毒后的發病率可高達90％～100％，犢牛感染病毒后，容易繼發引起細菌感染，促使犢牛的死亡率升高，同時也會嚴重影響犢牛的生長發育進而影響生產性能，此外輪狀病毒也可以感染人、綿羊、仔豬、犬、貓、雞、馬、兔、恒河猴和鼠等動物。

犢牛腹瀉是造成養牛業損失的重要原因之一，給牛肉和奶制品生產也造成了直接和間接經濟損失。引起犢牛腹瀉有很多的病原，包括病毒如BRV、牛病毒性腹瀉病毒、牛冠狀病毒等，細菌如沙門氏菌、大腸桿菌等，以及寄生蟲。其中，BRV感染的發病率和死亡率均較高，并且容易繼發其他病原體的感染，這些病原體導致犢牛腹瀉的臨床癥狀高度相似。除此之外，隨著養牛業的發展，大規模和集約化的飼養增加了牛與牛之間的身體接觸。這往往會導致兩種或兩種以上病原體的混合感染，從而加速傳染病的傳播，因此實驗室檢測顯得尤為重要。

目前輪狀病毒的主要診斷方法包括分離鑒定、血清中和試驗、ELISA技術、PCR、實時熒光定量PCR技術等。病毒分離鑒定是經典技術方法，不過該方法操作繁瑣，診斷花費時間較長；血清中和試驗和ELISA技術操作簡單、特異性較強、應用廣泛，不過該方法檢測時有嚴格的要求，因為誤差而有可能會引起陽性率下降；傳統的PCR技術是1985年研發出來的，不過傳統的PCR技術無法對模板DNA定量，并且最后結果是通過電泳輔助才能判讀，操作時間相對長，并且會出現假陽性；1993年Higuchi等人發明了實時熒光定量PCR技術，是將熒光物質與傳統PCR技術結合起來，讓擴增產物發出熒光。該技術綜合了光譜技術、傳統的PCR技術和計算機技術，其靈敏度高，特異性強，并且可以監測PCR擴增的所有過程，還能對樣品準確定量。但已有的PCR擴增技術尚存在敏感性、特異性不足的缺陷。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一發明目的在于提供一種用于檢測牛輪狀病毒的試劑盒。

本發明的第二發明目的在于提供一種檢測牛輪狀病毒的引物和探針。

為了完成上述發明目的，本發明采用的技術方案為：

本發明提出一種用于檢測牛輪狀病毒的試劑盒，所述試劑盒中含有核酸擴增試劑，所述核酸擴增試劑中含有用于檢測牛輪狀病毒的引物和探針，所述引物包括由SEQ IDNO:1所示的上游引物、由SEQ ID NO:2所示的下游引物；所述探針包括由SEQ ID NO:3所示的探針。

可選的，所述探針的5’端連接有熒光基團，3’端連接有熒光淬滅基團。

可選的，所述熒光基團選自HEX，所述熒光淬滅基團選自BHQ1。

可選的，所述引物和所述探針的濃度分別為：上游引物為350～450nmol/L，下游引物為350～450nmol/L，探針為250～350nmol/L；